使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預培養按照樣品的采集與預培養按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取發病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DN段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
參數規格：

產品名稱：豬源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
貨號：CP915087
產品規格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
產品特點：
本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

原理:
豬源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒所謂實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，產品僅用于科研Z后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步。
特點優勢：
    1.   特異性：所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過TIANDZ及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到。
    2.   重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為。
    3.   靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
    4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
    5.   優勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
    6.   優勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。
熒光定量PCR實驗步驟：
①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。

以下是豬源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒的相關產品：
1M Tris pH8.0英文名(EN)：Uric acid sodium salt No.：1198-77-2規格(SP)：1G類別(Key)：通用試劑

1M Tris pH8.5英文名(EN)：2,4-Dihydroxy-6-methylbenzoic acid,97% No.：480-64-8規格(SP)：250MG類別(Key)：通用試劑

1M Tris pH8.8英文名(EN)：Morpholine,≥99.0% No.：110-91-8規格(SP)：100ML類別(Key)：通用試劑

1M Tris-HCl, pH 6.8英文名(EN)：β-Naphthoflavone No.：6051-87-2規格(SP)：250MG類別(Key)：通用試劑

1ml比色皿  英文名(EN)：2,5-Diaminotoluene sulfate,97% No.：615-50-9規格(SP)：25G類別(Key)：通用試劑

1-磷葡萄糖鈉鹽(1-P-G)英文名(EN)：1-Vinyl-2-pyrrolidinone,≥99% No.：882-09-7規格(SP)：10G類別(Key)：通用試劑

2,4-D/2,4-二氯氧乙英文名(EN)：1-Vinyl-2-pyrrolidinone,≥99% No.：88-12-0規格(SP)：100ML類別(Key)：通用試劑

2，4-D溶液（2，4-D）英文名(EN)：Polylactic acid,Mw ~60,000 No.：26100-51-6規格(SP)：1G類別(Key)：通用試劑

2,4-表油菜素內酯英文名(EN)：4′-Hydroxy-3′-methoxyacetophenone,98% No.：498-02-2規格(SP)：25G類別(Key)：通用試劑

2,4-表油菜素內酯溶液(EBR)英文名(EN)：EDTA,3Na,≥98.0% No.：150-38-9規格(SP)：25G類別(Key)：通用試劑

2×DNA loading buffer (for denaturating urea gels)英文名(EN)：Sodium thiomethoxide,95% No.：1201108規格(SP)：1G類別(Key)：通用試劑

2×GC buffer英文名(EN)：3-Acetyldeoxynivalenol,98% No.：50722-38-8規格(SP)：1MG類別(Key)：通用試劑

2×ligation solution MasterMix英文名(EN)：9-Aminoacridine hydrochloride monohydr... No.：52417-22-8規格(SP)：5G類別(Key)：通用試劑

2×Long Taq PCR MasterMix英文名(EN)：3-Pyridylacetic acid hydrochloride,98% No.：6419-36-9規格(SP)：1G類別(Key)：通用試劑

2×pfu PCR MasterMix英文名(EN)：Sodium 2-oxobutyrate No.：2013-26-5規格(SP)：1G類別(Key)：通用試劑

2×SYBR qPCR MasterMix英文名(EN)：Sphingomyelin,≥97.0% No.：85187-10-6規格(SP)：25MG類別(Key)：通用試劑

2×Taq PCR MasterMix英文名(EN)：N-Acetyl-4-piperidone No.：32161-06-1規格(SP)：5G類別(Key)：通用試劑

2×Taq plus MasterMix英文名(EN)：2-Methylresorcinol,≥98.0% No.：608-25-3規格(SP)：25G類別(Key)：通用試劑

細菌甘露醇酵解酚紅瓊脂平板  進口/國產  規格：50個

細菌葡萄糖酵解溴百里酚藍（BTB）瓊脂平板  進口/國產  規格：50個

細菌乳糖酵解溴百里酚藍（BTB）瓊脂平板  進口/國產  規格：50個

細菌茁糖酵解溴百里酚藍（BTB）瓊脂平板  進口/國產  規格：50個

細菌西蒙（SIMMON）檸檬瓊脂平板  進口/國產  規格：50個

細菌淀粉瓊脂平板  進口/國產  規格：50個

細菌丁甘油脂瓊脂平板  進口/國產  規格：50個

細菌牛奶石蕾瓊脂平板  進口/國產  規格：50個

細菌明膠瓊脂平板  進口/國產  規格：50個

細菌尿素瓊脂平板  進口/國產  規格：50個
豬源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒Streptomyces│aureus資源名稱金色鏈霉菌提供形式:凍干物球孢白僵菌探針法熒光定量PCR試劑盒

Streptomyces acidiscabies資源名稱酸瘡痂鏈霉菌分離基物:馬鈴薯瘡痂貝氏貝諾孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

Cohnella│sp.資源名稱柯恩氏菌分離基物:土壤海藻百伯史坦菌探針法熒光定量PCR試劑盒

Bcillus│cereus資源名稱臘狀芽孢桿菌提供形式:凍干物兩岐雙岐桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

Salmonella│paratyphi A資源名稱甲型副傷寒沙門菌分離基物:血長雙歧桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

Mycobacterium│tuberculosis資源名稱結核分枝桿菌提供形式:凍結物雙歧桿菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒

Bifidobacterium│ruminantium資源名稱反芻雙歧桿菌分離基物:bovine rumen病毒探針法熒光定量PCR試劑盒