使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
參數規格：

產品名稱：大麥內標準PKABA1基因染料法PCR試劑盒
貨號:CP96881
產品規格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
?實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下是大麥內標準PKABA1基因染料法PCR試劑盒公司正在熱銷的產品：
Chicken IL-18(Interleukin 18) ELISA Kit資源名稱真氧產堿菌種屬:Alcaligenes│eutrophus提供形式:凍干物

Chicken IL-1β(Interleukin 1 Beta) ELISA Kit資源名稱柱狀假絲酵母種屬:Candida cylindracea提供形式:凍干物

Chicken IL-2(Interleukin 2) ELISA Kit資源名稱雷氏普羅威登斯菌種屬:Providencia rettgeri分離基物:從ATCC 9250中分離

Chicken IL-3(Interleukin 3) ELISA Kit資源名稱阿伯丁沙門氏菌種屬:Salmonella aberdeen提供形式:凍干物

Chicken IL-4(Interleukin 4) ELISA Kit資源名稱千葉類芽胞桿菌種屬:Paenibacilluschibensis分離基物:土壤

Chicken IL-5(Interleukin 5) ELISA Kit資源名稱腐皮鐮孢菌（斜面）種屬:Fusarium solani分離基物:蘋果爛根

Chicken IL-6(Interleukin 6) ELISA Kit資源名稱藍色犁頭霉種屬:Absidia│coerulea提供形式:凍干物

Chicken IL-8(Interleukin 8) ELISA Kit資源名稱模仿葡萄球菌種屬:Staphylococcus simulans提供形式:凍干粉、斜面

Chicken IL-9(Interleukin 9) ELISA Kit資源名稱紫色紅曲菌種屬:Monascus│purpureus提供形式:凍干物

Chicken LH(Luteinizing Hormone) ELISA Kit資源名稱腸炎沙門氏菌亞種種屬:Salmonella enterica subsp.分離基物:進口麥樂雞

Chicken LHRH/GnRH(Luteinizing Hormone Releasing Hormone) ELISA Kit資源名稱葡萄汁有孢漢遜酵母種屬:Hanseniaspora uvarum分離基物:蘋果

Chicken LIF(Leukemia Inhibitory Factor) ELISA Kit資源名稱高地芽胞桿菌種屬:Bacillus altitudinis分離基物:紅樹林土壤

Chicken MT(Melatonin) ELISA Kit資源名稱大腸埃希氏菌(凍干粉)種屬:Escherichia coli分離基物:人的糞便

Chicken NGF(Nerve Growth Factor) ELISA Kit資源名稱蛹蟲草(北冬蟲夏草，北蟲草)（斜面）種屬:Cordyceps militaris提供形式:斜面培養物，凍干物

Chicken NT-3(Neurotrophin-3) ELISA Kit資源名稱沼澤紅假單胞菌（菌液）（暫無）種屬:Rhodopseudomonas palustris提供形式:僅提供菌液

Chicken OPG(Osteoprotegerin) ELISA Kit資源名稱腸致病性大腸埃希氏菌種屬:Escherichia coli O157分離基物:腹瀉病例糞便標本

Chicken Pg(Progesterone) ELISA Kit資源名稱金黃色葡萄球菌亞種種屬:Staphylococcus aureus subsp.aureus Rosenbach分離基物:臨床分離

Chicken S100A6(S100 Calcium Binding Protein A6) ELISA Kit資源名稱具核梭桿菌聚核亞種種屬:Fusobacterium nucleatum subsp nucleatum提供形式:凍干粉

Chicken SCF(Stem Cell Factor) ELISA Kit資源名稱巴氏芽孢桿菌種屬:Bacillus pasteurii提供形式:凍干粉

Chicken TIMP-2(Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 2) ELISA Kit資源名稱艱難梭菌種屬:Clostridium difficile提供形式:凍干物
大麥內標準PKABA1基因染料法PCR試劑盒Apo B 100|Apo B 48|APOB|ApoB100|Apolipoprotein B|Apolipoprotein B 100|FLDB3%堿性蛋白胨水產品用途：3%堿性蛋白胨水用于嗜鹽性細菌特別是副溶血性弧菌及創傷弧菌的前增菌培養。(GB)產品規格：10mlX20支冷藏：2-8℃

ANF|ANP|ATFB6|Atrial natriuretic factor|Atrial natriuretic peptide|CDD ANF|CDP|NPPA|PND|Prepronatriodilatin弧菌顯色瓊脂培養基平板產品用途：弧菌顯色瓊脂培養基平板用于水產品及食物中毒樣品中弧菌特別是副溶血性弧菌的分離和初步鑒別。(GB、SN)產品規格;90mmX20個冷藏：2-8℃

BNP|BNP(1 32)|Natriuretic peptides B|NPPBBolton肉湯產品用途：Bolton肉湯用于空腸彎曲桿菌的選擇性增菌。(GB)產品規格：100mlX6瓶冷藏：2-8℃

NT-proBNP|N-Terminal Pro-Brain Natriuretic PeptideBolton肉湯(含羊血)產品用途：Bolton肉湯用于空腸彎曲桿菌的選擇性增菌。(GB)產品規格：225mlX6瓶冷藏：2-8℃

T3|Triiodothyronine改良CCD瓊脂平板產品用途：改良CCD瓊脂平板用于空腸彎曲桿菌的選擇性分離培養。(GB)規格：90mmX20個冷藏：2-8℃

T4|ThyroxineSkirrow瓊脂平板產品用途：Skirrow瓊脂平板用于空腸彎曲桿菌的選擇性分離培養。(GB)規格：90mmX20個冷藏：2-8℃

FSH(Follicle-Stimulating Hormone)改良磷酸鹽緩沖液(PSB)產品用途：改良磷酸鹽緩沖液(PSB)用于小腸結腸炎耶爾森氏菌的增菌培養。(GB、ISO)規格：225mlX6瓶冷藏：2-8℃

LH(Luteinizing Hormone)|Lutropin|LutrophinCIN-1瓊脂平板產品用途：CIN-1瓊脂平板用于小腸結腸炎耶爾森氏菌的選擇性分離培養。(GB)規格：90mmX20個冷藏：2-8℃