在生物化學(xué)上,多數(shù)細胞凋亡檢測的過程中,內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶活化,活性增加。核DNA隨機地在核小體的連接部位被酶切斷,降解為180-200bp或它的整倍數(shù)的各種片斷。如果對核DNA進行瓊脂糖電泳,可顯示以180-200bp為基數(shù)的DNA ladder(梯狀帶紋)的特征。
許多同學(xué)對細胞消化做了許多研究,得出了很多有價值的經(jīng)驗,也見到很多人的困惑。其實細胞培養(yǎng),尤其是細胞系的培養(yǎng),就消化而言,不是太難,做得多了,善于總結(jié)經(jīng)驗,就能把細胞越養(yǎng)越好。一般的程序步驟,細節(jié)操作,我這里就不講了,只講一些基本操作背后的知識,如果不對之處,歡迎指正,一起討論:
1、其實絕大部分細胞消化的時候是只要用*潤洗一遍即可,吸去*后,殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量*在37度一般不到2min足夠消化細胞(絕大部分1min不到)。對于這些細胞原則上不要用*孵育細胞,連續(xù)這樣傳代,對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,*潤洗吸去,然后37度消化。
2、什么算是消化好了呢?不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙壯移動,其實已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細胞消化或者吹打成*分離細胞,這是沒有必要的。一般能移動了,說明細胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了,細胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細胞已經(jīng)獨立分布了(雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個時候應(yīng)該停止消化,不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細胞就是*成單個細胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會聚集,這個是貼壁培養(yǎng)的細胞,尤其是腫瘤細胞的一個特性,無論死活的細胞都是如此,你可以嘗試,準備的單個細胞懸液,貼壁后觀察細胞,仍然是幾個幾個細胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細胞也是如此,容易聚集,不要去嘗試過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液
細胞膜是一選擇性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿過質(zhì)膜。當細胞壞死時,質(zhì)膜不完整,PI就進入細胞內(nèi)部,它可嵌入到DNA或RNA中,使壞死細胞著色,細胞凋亡檢測和活細胞不著色。而一些活細胞染料由于為親脂性物質(zhì),可跨膜進入活細胞,因而可進行活細胞染色。Hoechst33342是一種活性熒光染料且毒性較弱,它是雙苯并咪唑的一種衍生物。與DNA特異結(jié)合(主要結(jié)合于A-T)堿基區(qū)),顯示凋亡細胞和活細胞。凡是看到有凋亡小體的細胞都是凋亡細胞。
100031-200304 含量測定 100mg *
100032- 50mg *
100033-200607 含量測定 100mg *
010034-200503 含量測定 100mg 枸櫞酸氯米芬
50mg 甲磺酸雙氫麥角毒堿
100037-200306 含量測定 50mg *
100038-200803 檢查用 100mg 鄰甲苯磺酰胺
100039-200602 檢查用 100mg 6-巰基嘌呤
100042-200002 檢查用 50mg 2-氯-4-硝基苯胺
100043-199701 檢查用 50mg *
50mg 馬來酸*
細胞凋亡檢測
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