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重組蛋白 A/G1mg操作步驟

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更新時間:2017-07-19 14:26:56瀏覽次數:112次

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重組蛋白 A/G1mg操作步驟如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

重組蛋白 A/G1mg操作步驟產品及特點:
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質的主要方法,但是單獨配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發了本產品。它具有下列特點:
1.
一站式,即開即用,用戶不需單獨準備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍色,便于上樣時識別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。
重組蛋白 A/G1mg操作步驟對于組織樣品:
1. 把*切成細小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
重組蛋白 A/G1mg操作步驟對于培養細胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM
2. 裂解細胞 2.1 對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分 裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高 可以適當加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
GELLOADINGBUFFER,4X(BPB)DNA電泳上樣緩沖液,4X生物技術級5MLRT

(油紅O(蘇丹紅5B))

酸性紅92,英文名或英文縮寫:Phloxine B,級別:超純,規格:100

4.4’異亞炳基聯本酚,99+% Bisphqnol c 1980-2-7

錄代十六烷基,英文名或英文縮寫:Hexadecylpyridinium chloride,級別:IND,規格:1公斤
微量可調移液器P1000 Gilson原裝

OCTYL-THIOGLUCOSIDE辛基-β-D-硫代葡萄糖苷超純級白色固體FRZsigma

聚烯亞安 50% in water POLYqTHYLqNqIMINq, BRcNCHqD 900-98-6

乙醛脫氫酶/Aldehyde Dehydrogenase, potassium-activated BR2u/mg 25U 國產/進口

反式-1,2-環己二胺四乙酸/-1,2-環己二胺-N,N,N,N-四乙酸/1,2-環己二胺四乙酸/反式-1,2-二基
7,8-Benzoinoneolineα-100毫克CP98.5%

1999-9-23-硝基本胺()3-nitnoaniline

L-2--33-二甲基丁酸,英文名或英文縮寫:L-tert-Leucine,級別:BR99%,規格:5

3,5-二溴 3,5-Dibromopyridinq 1962/9/3

HISTOCHOICEDERMATOLOGYFIXATIVE皮膚組織固定劑組織學級無色至微黃無混濁液體RTsigma
SRGN Others Human Serglycin / SRGN 人細胞裂解液 (陽性對照)

人胚肺二倍體細胞;2BS

HEC-1-B 人子宮內膜腺癌細胞

ACHN人腎細胞腺癌細胞 ACHN human renal cell carcinoma cells MEM培養基(GIBCO)+10%FBS

TNF Protein Mouse 重組小鼠 TNF-alpha / TNFA 蛋白

大鼠顆粒細胞(RGC)(1×106) U-2 OS, 人骨肉瘤細胞 Human
人胚肺二倍體細胞;2BS

SRGN Others Human Serglycin / SRGN 人細胞裂解液 (陽性對照)

HEC-1-B 人子宮內膜腺癌細胞

ACHN人腎細胞腺癌細胞 ACHN human renal cell carcinoma cells MEM培養基(GIBCO)+10%FBS

TNF Protein Mouse 重組小鼠 TNF-alpha / TNFA 蛋白

大鼠顆粒細胞(RGC)(1×106) U-2 OS, 人骨肉瘤細胞 Human
重組蛋白 A/G1mg操作步驟SFRP1 Others Mouse 小鼠 sFRP1 人細胞裂解液 (陽性對照)

CL-0056CCD-1095Sk(人浸潤性導管癌旁皮膚細胞)5×106cells/瓶×2

LTA4H Others Human Leukotriene A4 Hydrolase / LTA4H 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

Cates-1B細胞,人淋巴胚胎性癌細胞 SV40T轉化的人胚腎細胞(亞系),293T/17細胞 食管上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

大耳山羊肺細胞;LDG-1

β-半乳糖苷酶比色檢測試劑盒GalC

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