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小鼠內皮細胞分離液 1.071200mL操作步驟

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更新時間:2017-07-20 10:41:38瀏覽次數:596次

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小鼠內皮細胞分離液 1.071200mL操作步驟如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

小鼠內皮細胞分離液 1.071200mL操作步驟對于培養細胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM
2. 裂解細胞 2.1 對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分 裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高 可以適當加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
小鼠內皮細胞分離液 1.071200mL操作步驟產品及特點:
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質的主要方法,但是單獨配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發了本產品。它具有下列特點:
1.
一站式,即開即用,用戶不需單獨準備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍色,便于上樣時識別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。
小鼠內皮細胞分離液 1.071200mL操作步驟詳細說明書:

小鼠內皮細胞分離液 1.071200mL操作步驟對于組織樣品:
1. 把*切成細小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
品紅亞鈉培養基(濾膜法用)1

Tween60 100ml Sigma分裝

甘油醛-3-嶙酸脫氫酶shēng huà shì jì容量:5

4-拂本加醋;隊拂本加醋 4-Fluorobqnzoic ccid 426--4

反玉米素核苷shēng huà shì jì容量:25
司盤20shēng huà shì jì容量:RT500

反式-2-本基環炳安言醋鹽(2-8) TRcNS-2-PHqNYLCYCLOPROPYLcMINq xy7noCHLORIDq 1986-47-6

4-metxoxypxenylhydrezine xy7nochloride 19501-58-7

2-噻噸酮 2-Chlorothioxanthen-9-one,98% 86-39-5 1G 通用試劑

γ-L-谷酰-α-酰胺/γ-L-谷酰-1-酰胺/N-(γ-L-谷酰)-1-/γ-L-Gluta
BACITRACINZINC*美國藥典級灰白色粉末COLDsigma

98-94-81-甲基;α-甲基1-metxyl

Xmol/L-xy7nochloricacidBuffersolutionXmol/L鹽酸緩沖液1公斤BR98%

3--4-肖基本加醋 3-Mqthyl-4-nitnobqnzoic ccid 3113-71-1

Triscaonate三羥甲基基甲烷碳酸鹽10*10mg/CP99%
LAYN Others Rat 大鼠 Layilin / LAYN 人細胞裂解液 (陽性對照)

人整合SV40基因的上皮細胞;HBL-100 [HBL100]

CM-H042人肝內膽管上皮細胞*培養基100mL

HCT116細胞,人結直腸癌細胞 人黑色素瘤細胞,HME1細胞 人胚肺二倍體細胞;KMB-17

GBC-SD(人膽囊癌細胞) 5×106cells/瓶×2

BACE1 Others Mouse 小鼠 BACE-1 人細胞裂解液 (陽性對照)
人整合SV40基因的上皮細胞;HBL-100 [HBL100]

CD7 Others Rat 大鼠 CD7 人細胞裂解液 (陽性對照)

人腎小球內皮細胞*培養基 100mL

EL4.IL-2細胞,小鼠淋巴瘤細胞 Mo-MuLv/3T3(Mo-MuLv感染的3T3細胞) 人皮膚成纖維樣細胞;HSF2

CXCL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白 (His 標簽)

Sf-21(昆蟲細胞) 5×106cells/瓶×2 ENPEP / Aminopeptidase A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠內皮細胞分離液 1.071200mL操作步驟人脂肪細胞-內臟(HPA-v)(1×106 ) MDA-MB-231(ATCC來源), 人癌細胞 Human

人急性淋巴母細胞性白血病細胞;MOLT-4

SPN Others Mouse 小鼠 SPN / CD43 人細胞裂解液 (陽性對照)

SW1116人結腸腺癌細胞 SW1116 human colon adenocarcinoma cells L-15培養基(GIBCO)+10%FBS

CD70 Protein Rat 重組大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 蛋白 (Fc 標簽)

EJ 人膀胱癌細胞

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