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亞氨二乙酸介質10mL操作步驟

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更新時間:2017-07-19 14:59:01瀏覽次數:106次

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亞氨二乙酸介質10mL操作步驟如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

亞氨二乙酸介質10mL操作步驟對于培養細胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM
2. 裂解細胞 2.1 對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分 裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高 可以適當加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
亞氨二乙酸介質10mL操作步驟產品及特點:
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質的主要方法,但是單獨配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發了本產品。它具有下列特點:
1.
一站式,即開即用,用戶不需單獨準備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍色,便于上樣時識別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。
亞氨二乙酸介質10mL操作步驟詳細說明書:

亞氨二乙酸介質10mL操作步驟對于組織樣品:
1. 把*切成細小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
D-絲酸甲酯鹽酸鹽100

PHA-P 5mg/10mg Sigma分裝

松油醇,英文名或英文縮寫:Terpineol,級別:AR,99%,規格:500

三拂磺醋鋇 BcRIUM TRIFLUOROMqTHcNqSULFONcTq 794-60-7

化四甲基,英文名或英文縮寫:Tetrametxylammonium iodide,級別:AR,98%,規格:1
兔肌動蛋白,英文名或英文縮寫:Actin from rabbit muscle,級別:B,75u/mg,規格:50毫克

拂化鋅 Zinc fluoridq 7783-49-2

metxyl 3-chlorothiopxene-2-carboxylate 88105-17-3

2,3-二溴丙酸乙酯 Ethyl 2,3-dibromopropionate,97% 3674-13-3 25G 通用試劑

十二烷基苯磺酸鈉/Sodium dodecylbenzenesulfonate AR90%, 250 國產
ACESACES高純級白色結晶粉末RTsigma

X-GlucNa 10mg原裝/100mg原裝 INALCO1758-0700

Taqshēng huà shì jì容量:100

4-溴本迷;隊溴本迷;1--4-氧基本;隊溴茴香迷 4-BroMocnisolq;p-BroMocnisolq;1-BroMo-4-Mqthoxybqnzqnq;p-BroMophqnol Mqthyl qtqr 104-9-7

N-羥基琥珀酰亞胺*shēng huà shì jì容量:保存:-20100毫克
IL13 Others Cynomolgus 食蟹猴 IL-13 / Interleukin-13 人細胞裂解液 (陽性對照)

人臍帶間充質干細胞裂解物HUMSCL

BABL/3T3 BABL/C小鼠胚胎成纖維細胞

CL-0182P815(小鼠肥大細胞瘤細胞)5×106cells/瓶×2

小鼠骨髓間充質干細胞(BMSCs)

人整合SV40基因的上皮細胞;HBL-100 [HBL100] 人腎動脈平滑肌細胞*培養基 100mL
人臍帶間充質干細胞裂解物HUMSCL

IL13 Others Cynomolgus 食蟹猴 IL-13 / Interleukin-13 人細胞裂解液 (陽性對照)

BABL/3T3 BABL/C小鼠胚胎成纖維細胞

CL-0182P815(小鼠肥大細胞瘤細胞)5×106cells/瓶×2

小鼠骨髓間充質干細胞(BMSCs)

人整合SV40基因的上皮細胞;HBL-100 [HBL100] 人腎動脈平滑肌細胞*培養基 100mL
亞氨二乙酸介質10mL操作步驟GNM(人口腔鱗癌頸淋巴結轉移癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0320BC3H1(小鼠腦瘤細胞)5×106cells/瓶×2 小型豬腎細胞;MPK

小鼠肺腺癌細胞系;LA795

CRELD1 Others Human CRELD1 人細胞裂解液 (陽性對照)

SF17細胞,人腦瘤細胞 洋蔥假單胞菌 人角膜細胞總RNAHK tRNA

RL1(大鼠肺成纖維樣細胞) 5×106cells/瓶×2

SH-SY5Y人神經母細胞瘤細胞 SH-SY5Y human neuroblastoma cells MEM/F-12(1:1)+10%FBS

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