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Tricine-SDS-PAGE 配膠液1000mL操作步驟

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更新時間:2017-07-19 15:14:47瀏覽次數:292次

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Tricine-SDS-PAGE 配膠液1000mL操作步驟如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

Tricine-SDS-PAGE 配膠液1000mL操作步驟產品及特點:
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質的主要方法,但是單獨配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發了本產品。它具有下列特點:
1.
一站式,即開即用,用戶不需單獨準備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍色,便于上樣時識別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。
Tricine-SDS-PAGE 配膠液1000mL操作步驟詳細說明書:

Tricine-SDS-PAGE 配膠液1000mL操作步驟對于組織樣品:
1. 把*切成細小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
Tricine-SDS-PAGE 配膠液1000mL操作步驟對于培養細胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM
2. 裂解細胞 2.1 對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分 裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高 可以適當加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
馬脾鐵蛋白25

(*)

氧化錳(),英文名或英文縮寫:Manganese dioxide,級別:AR98%,規格:100毫克

9,9-二基氧雜 96% 9,9-DIMqTHYL-9H-XcNTHqNq 19814-72-6

三氧化二鉍,英文名或英文縮寫:Bismuthous oxide,級別:TLC,規格:100
透明質酸酶shēng huà shì jì容量:RT1

95-78-32,5-2,5-Dimetxylaniline

甲狀旁腺激素PTH1-841公斤

2-溴本全;鄰溴本全 2-BroMobqnzcldqhydq;o-BroMobqnzcldqhydq 6630-33-7

CBZ-L-羥脯酸1RT
ACRYL-40SOLUTION丙烯酰胺,40%溶液蛋白組學級透明無色溶液COLDsigma

7789-9-5重鉻酸銨;重鉻酸铔,氮氫紅礬,紅礬銨AMMoniuM dichroMate

MOPSwo7iumSALTMOPS, Na高純級白色粉末RTsigma

-3,4,9,10-四羧酸... Perylene-3,4,9,10-tetracarboxylic dian... 128-69-8 10G 通用試劑

* (高純) Gentamicin sulfate salt (590 μg/mg)
CDH1 Others Human E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 人細胞裂解液 (陽性對照)

人前列腺癌高轉移細胞株;PC-3M IE8

CM-R050大鼠卵巢顆粒細胞*培養基100mL

BGC-823細胞,人低分化胃癌細胞 人腦膠質母細胞瘤細胞,SW038-C2細胞 EB病毒轉化的絨猴淋巴細胞;B95-8

COLO 320(人結腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2

CD14 Others Human CD14 人細胞裂解液 (陽性對照)
人前列腺癌高轉移細胞株;PC-3M IE8

CDH1 Others Human E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 人細胞裂解液 (陽性對照)

CM-R050大鼠卵巢顆粒細胞*培養基100mL

BGC-823細胞,人低分化胃癌細胞 人腦膠質母細胞瘤細胞,SW038-C2細胞 EB病毒轉化的絨猴淋巴細胞;B95-8

COLO 320(人結腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2

CD14 Others Human CD14 人細胞裂解液 (陽性對照)
Tricine-SDS-PAGE 配膠液1000mL操作步驟人臍靜脈內皮細胞(人膀胱癌細胞污染);ECV-304 [ECV304;ECV 304] 人腸靜脈內皮細胞*培養基 100mL

人前列腺成纖維細胞RNAHPrF miRNA5 μg

BLNK Others Human BLNK 人細胞裂解液 (陽性對照)

CL-0458U-118 MG(人腦星形膠質母細胞瘤)5×106cells/瓶×2

人腦微血管內皮細胞

PANC-1 人胰腺癌細胞

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