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5-Fluorouracil(5- 氟脲嘧啶 )1mL操作步驟

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更新時間:2017-07-20 09:41:45瀏覽次數(shù):171次

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5-Fluorouracil(5- 氟脲嘧啶 )1mL操作步驟如果組織樣品本身非常細小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

5-Fluorouracil(5- 氟脲嘧啶 )1mL操作步驟產(chǎn)品及特點:
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質(zhì)的主要方法,但是單獨配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點:
1.
一站式,即開即用,用戶不需單獨準備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質(zhì)的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍色,便于上樣時識別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。
5-Fluorouracil(5- 氟脲嘧啶 )1mL操作步驟詳細說明書:

5-Fluorouracil(5- 氟脲嘧啶 )1mL操作步驟對于組織樣品:
1. 把*切成細小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
5-Fluorouracil(5- 氟脲嘧啶 )1mL操作步驟對于培養(yǎng)細胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM
2. 裂解細胞 2.1 對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分 裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細胞密度非常高 可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
嶙酸二氫500

Spermine4HCl 250mg/1g/5g原裝 Sigma S2876

十八冠醚-6shēng huà shì jì容量:25

4-正忻基本酚, 99% 4-N-OCTYLPHqNOL 1806-6-4

溶葡球菌酶shēng huà shì jì容量:100
酸性綠5,英文名或英文縮寫:Light green SF yellowish,級別:AR40-44.5%,規(guī)格:5

硅藻土NNA

肌球素,英文名或英文縮寫:Myoglobin from einonee skeletal muscle,級別:BR2-6u/mg,規(guī)格:25

4'-O-甲基補骨脂查... O-Methylbroussochalcone B (HPLC,98%) 20784-60-5 20MG 標(biāo)準品

拂米松 Flumqthcsonq 132-17-3
Ammoniumbromide溴化铔500AR99.8%

偏釩醋銀 Silvqr Mqtcvcncdctq 13497-94-4

2,7-Diiodofluorene 16218-28-3

甜菜堿 Betaine (98%,HPLC) 107-43-7 20MG 標(biāo)準品

DL-脯酸/DL-Proline BR99% 25 國產(chǎn)/進口
NOV Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CCN3 / NOV Baculovirus-Insect cells Transfected Lysate (positive control) (denatured)

人無色素睫狀上皮細胞HNPCEpiC

恒河猴腎細胞;LLC-MK2

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化);PC-12(低分化) 肝癌細胞,BEL-7402細胞 D3細胞,129小鼠ES細胞

MiaPaCa-2, 人胰腺癌細胞 Human

CST4 Others Human CST4 / Cystatin-4 / Cystatin-S 人細胞裂解液 (陽性對照)
人無色素睫狀上皮細胞HNPCEpiC

NOV Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CCN3 / NOV Baculovirus-Insect cells Transfected Lysate (positive control) (denatured)

恒河猴腎細胞;LLC-MK2

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化);PC-12(低分化) 肝癌細胞,BEL-7402細胞 D3細胞,129小鼠ES細胞

MiaPaCa-2, 人胰腺癌細胞 Human

CST4 Others Human CST4 / Cystatin-4 / Cystatin-S 人細胞裂解液 (陽性對照)
5-Fluorouracil(5- 氟脲嘧啶 )1mL操作步驟小鼠海馬趾神經(jīng)細胞(MH-h)(1×106) HCT116, 人結(jié)直腸癌細胞 Human

家貓腎細胞;CATK1

IFNA4 Others Mouse 小鼠 IFNA4 / Interferon alpha-4 人細胞裂解液 (陽性對照)

22RV1人前列腺癌細胞 Human prostate cancer 22RV1 cells 人前列腺癌

其他細胞因子

JeKo-1 人套細胞淋巴瘤細胞

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