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Actinomycin D( 基因轉錄抑制劑 )1mg操作步驟

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更新時間:2017-07-20 09:43:57瀏覽次數:128次

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Actinomycin D( 基因轉錄抑制劑 )1mg操作步驟如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

Actinomycin D( 基因轉錄抑制劑 )1mg操作步驟詳細說明書:

Actinomycin D( 基因轉錄抑制劑 )1mg操作步驟產品及特點:
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質的主要方法,但是單獨配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發了本產品。它具有下列特點:
1.
一站式,即開即用,用戶不需單獨準備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍色,便于上樣時識別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。
Actinomycin D( 基因轉錄抑制劑 )1mg操作步驟對于組織樣品:
1. 把*切成細小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
Actinomycin D( 基因轉錄抑制劑 )1mg操作步驟對于培養細胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入 PMSF 使 PMSF 的終濃度為 1mM
2. 裂解細胞 2.1 對于貼壁細胞:去除培養液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分 裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高 可以適當加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
硼酸500

StarchSoluble 100g/250g/1kg原裝 Sigma S9765

三羥甲基基甲烷碳酸鹽shēng huà shì jì容量:保存:-20250毫克

隊肖基本-α-D-葡萄糖苷(-20) 4-nitnOPHqNYL-cLPHc-D-GLUCOPYRcNOSIDq 3767-8-0

蚯蚓酶shēng huà shì jì容量:25
酸性藍147,英文名或英文縮寫:Xylene cyanole FF,級別:BR99%,規格:25

590-18-1-2-丁烯 99%CIS-2-BUTENE

4-Bromo-1-metxylnepxtxelene 6627-78-7

2-(二叔丁基膦)聯苯 2-(Di-tert-butylphosphino)biphenyl,97% 224311-51-7 1G 表面活性劑

GDX 101(聚二烯本多孔小球) Nc
AMMONIUMCHLORIDE錄化ACS級白色顆粒粉末RTsigma

那拉曲坦混合物Naratriptan Resolution Mixture;

次*10

4-基安替吡啉 4-Aminoantipyrine, 99% 1983-7-8 10G 通用試劑

N-異丙基苯胺 N-Isopropylaniline,97% 768-52-5 1G 通用試劑
CLEC7A Others Human CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 人細胞裂解液 (陽性對照)

人小膠質細胞裂解物HML

人胃癌細胞;MKN-45

小鼠胰腺癌細胞(B);Pan02 透明質酸酶(100mL酶解緩沖液) 10mL

A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細胞株 Human

PLA2G1B Others Human PLA2G1B / PLA2 人細胞裂解液 (陽性對照)
人小膠質細胞裂解物HML

CLEC7A Others Human CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 人細胞裂解液 (陽性對照)

人胃癌細胞;MKN-45

小鼠胰腺癌細胞(B);Pan02 透明質酸酶(100mL酶解緩沖液) 10mL

A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細胞株 Human

PLA2G1B Others Human PLA2G1B / PLA2 人細胞裂解液 (陽性對照)
Actinomycin D( 基因轉錄抑制劑 )1mg操作步驟小鼠中腦縫神經細胞(腦脊)(MN-r)(1×106) HT-29, 人結腸癌細胞 Human

兔主動脈平滑肌細胞;SMC

IL12A & IL12B Others Mouse 小鼠 IL12A & IL12B Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照)

NCI-H716 [H716]人結直腸腺癌細胞 NCI-H716 [H716] human colorectal adenocarcinoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS

VEGFA Protein Human 重組人 / 食蟹猴 VEGF / VEGFA / VEGF165 蛋白

J82 人膀胱移行細胞癌

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