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免疫組化抗體選擇流程2025/07/01: 選擇免疫組化抗體時(shí)，需要考慮多個(gè)關(guān)鍵因素以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和特異性。以下是一步一步的流程：1.確定目標(biāo)蛋白：明確您想要檢測(cè)的蛋白名稱，包括中英文名字、別名等信息。檢查目標(biāo)蛋白的同分異構(gòu)體、功能域、加工形式以及可能的翻譯后修飾，以確保選擇的抗體能識(shí)別您的特定目標(biāo)。2.確認(rèn)抗體特異性：驗(yàn)證抗體說(shuō)明書(shū)中的UniProtID是否與您的目標(biāo)蛋白一致，避免同源蛋白的交叉反應(yīng)。使用NCBIBLAST工具分析目標(biāo)蛋白序列，確認(rèn)抗體不會(huì)與相似序列的其他蛋白質(zhì)發(fā)生非特異性結(jié)合。3.選擇一抗類型：?jiǎn)慰寺】贵w（mAb）

原代細(xì)胞的提取操作過(guò)程2025/06/24: 原代細(xì)胞的提取的整個(gè)操作過(guò)程：1.整個(gè)操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺(tái)下進(jìn)行，所有的器件要高壓消毒。2.依據(jù)BALB/c小鼠的體重，用10ml/kg3%濃度的麻醉；將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi)，這一步不只能夠消毒，也能夠讓小鼠體毛浸濕，后續(xù)剃去皮毛的時(shí)分不會(huì)沾到剪刀或安排上。3.用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟，裝有PBS的注射器刺進(jìn)心尖，同時(shí)在右心耳處剪開(kāi)一個(gè)小口，緩慢推進(jìn)注射器，隨著心臟的跳動(dòng)，將體內(nèi)的血液沖洗出來(lái)。4.取出小鼠的肺部安排，將肺安排切成小米粒樣的巨細(xì)，置于預(yù)冷的HBSS中反復(fù)沖洗幾回。5

細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn)步驟2025/06/16: 細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn)步驟：1.制備凍存液，凍存液比例：本實(shí)驗(yàn)室采用70%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO，不同實(shí)驗(yàn)室及不同細(xì)胞可能略有差異，也可采用55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO；2.取形態(tài)良好，處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，對(duì)其消化、離心(1500rpm離心8min)、計(jì)數(shù)；3.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入對(duì)應(yīng)的凍存液，使細(xì)胞密度維持在300-500w/mL；4.小心用鑷子打開(kāi)凍存管管蓋，每管分裝1-1.5mL含細(xì)胞的凍存液，擰緊蓋管，做好標(biāo)記。5.分裝好的凍存管轉(zhuǎn)入程序降溫盒后直接放-80℃過(guò)夜；

PCR反應(yīng)電泳后一般常見(jiàn)的幾種條帶2025/06/09: PCR擴(kuò)增后一般進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析，電泳后一般有以下幾種條帶：1、引物帶。引物濃度過(guò)高或是擴(kuò)增效率不是特別高時(shí)都會(huì)有，一般不呈現(xiàn)為細(xì)帶，為發(fā)散狀；如果目的擴(kuò)增產(chǎn)物帶和引物帶都很亮，可以考慮適當(dāng)降低引物量。2、引物二聚體帶。比引物跑得慢一點(diǎn)，條帶清晰，但如果擴(kuò)增產(chǎn)物小于100bp時(shí)，產(chǎn)物與引物二聚體就不好分別了，建議采用DNA聚丙烯酰胺電泳（不是蛋白質(zhì)的SDS聚丙烯酰胺電泳）；如果引物二聚體在優(yōu)化復(fù)性溫度后仍然嚴(yán)重影響目的產(chǎn)物的擴(kuò)增，優(yōu)先考慮更換引物設(shè)計(jì)（因?yàn)橐锖铣傻某杀颈确磸?fù)優(yōu)化條件的成本

ELISA試劑盒試驗(yàn)血清和血漿收集處理2025/06/04: 1、血清血清是zui常用于ELISA檢測(cè)的一類樣本，處理也比較簡(jiǎn)單。用無(wú)熱原、無(wú)內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本，將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，使血清析出。（最好將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出。）4℃1000×g離心20分鐘，仔細(xì)收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。采血過(guò)程中應(yīng)避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)釋放具有過(guò)氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測(cè)中會(huì)有非特異性的顯色，而導(dǎo)致檢測(cè)的不準(zhǔn)確性。同時(shí)也應(yīng)避免細(xì)

血清不穩(wěn)定劣勢(shì)具體分析2025/05/27: 血清最大的劣勢(shì)就是不穩(wěn)定，不穩(wěn)定原因如下：1、來(lái)源不穩(wěn)定以胎牛血清為例，懷孕母牛在屠宰前腹部被剖開(kāi)，取出胎牛，在低溫?zé)o菌條件下，刺破胎牛的心臟以獲取血清。就這一條，動(dòng)物倫理組織就可以把你攔住嘮嘮。另外，牛血清必須來(lái)自有文件證明無(wú)牛海綿狀腦病的牛群或國(guó)家，我國(guó)在對(duì)牛血清的質(zhì)量《中國(guó)生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)2000》中提出比較嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)要求，包括蛋白質(zhì)含量，細(xì)菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細(xì)菌內(nèi)毒素，細(xì)胞增殖支持等檢查。2、組分不穩(wěn)定還有最讓人鬧心的，動(dòng)物血清成分復(fù)雜，其組分及含量常和

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)有哪些？2025/05/19: 細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)是在細(xì)胞房中進(jìn)行，在超凈工作臺(tái)或生物安全柜中，把細(xì)胞處理好，根據(jù)需要加入細(xì)胞培養(yǎng)基，放入細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿或細(xì)胞培養(yǎng)板中，再放到帶有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。2.研究條件可以人為控制pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行

細(xì)胞周期操作步驟2025/05/14: 細(xì)胞周期指細(xì)胞一個(gè)世代所經(jīng)歷的時(shí)間。從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個(gè)周期。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。操作步驟：1、細(xì)胞生長(zhǎng)至指數(shù)期時(shí)，向培養(yǎng)液中加入BrdU，使終濃度為10μg/ml。2、44小時(shí)加秋水仙素，使每ml中含0.1μg。3、48小時(shí)后常規(guī)消化細(xì)胞至離心管中，注意培養(yǎng)上清的漂浮細(xì)胞也要收集到離心管中。4、常規(guī)染色體制片（見(jiàn)第三部分：染色體技術(shù)）。5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上，鋪上2×SSC液，距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘。6、棄去2×SSC液，流水沖洗。7、Giem

PCR反應(yīng)技術(shù)主要特點(diǎn)2025/05/06: PCR反應(yīng)在生物體外大量擴(kuò)增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，其特點(diǎn)是可以以微量的DNA為模板，快速擴(kuò)增得到大量拷貝。PCR反應(yīng)特點(diǎn)：1.特異性強(qiáng)。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及TaqDNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合（復(fù)性）可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。2.靈敏度高。PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克（pg=10

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)實(shí)驗(yàn)操作步驟2025/04/27: 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)實(shí)驗(yàn)操作步驟：1、RNA提取：針對(duì)莖環(huán)狀結(jié)構(gòu)RT引物，RNA正常提取就好;對(duì)于Oligod(T)特異的RT引物，盡量用特殊試劑盒提取miRNA。2、反轉(zhuǎn)錄：反轉(zhuǎn)錄過(guò)程對(duì)酶沒(méi)有特殊要求，操作按照反轉(zhuǎn)錄酶的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。對(duì)于引物，在反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中只需加入Oligod(T)特異的RT引物或莖環(huán)狀結(jié)構(gòu)RT引物，不需要另外添加其他RT引物。用Oligod(T)特異的RT引物時(shí)，RNA需要進(jìn)行3'Poly(A)加尾處理。內(nèi)參基因不需要單獨(dú)設(shè)計(jì)RT引物，可以用熒光定量PCR的反向引物作為RT

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的管理事項(xiàng)2025/04/21: 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的管理事項(xiàng):（一）規(guī)范記錄：建立標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)臺(tái)帳，定期更新臺(tái)賬，明確責(zé)任主體，以便做到可以追本溯源；領(lǐng)用時(shí)，記錄好領(lǐng)用時(shí)的名稱、數(shù)量、時(shí)間、領(lǐng)用人、發(fā)放人等必要的信息；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)在有效期內(nèi)使用，應(yīng)定期檢查標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的有效期，對(duì)于超限的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)要填寫(xiě)銷(xiāo)毀登記表；建立標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檔案。（二）定期核查：對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的種類、級(jí)別、介質(zhì)、濃度含量、有效期、批號(hào)、環(huán)境條件、儲(chǔ)存方法、帳物相符等等各參數(shù)，要定期核查。定期檢查實(shí)驗(yàn)室各檢測(cè)項(xiàng)目所對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是否相符。對(duì)新增檢測(cè)項(xiàng)目所對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)及時(shí)納入規(guī)范管

影響ELISA試劑盒變質(zhì)因素詳細(xì)分析2025/04/15: ELISA試劑盒變質(zhì)是ELISA實(shí)驗(yàn)中比較常見(jiàn)的問(wèn)題，那么，ELISA試劑盒變質(zhì)影響ELISA試劑盒質(zhì)保。一旦變質(zhì)會(huì)有什么影響呢？現(xiàn)為大家詳細(xì)分析下。1、試劑因素不同批次的ELISA試劑在制作過(guò)程中很難保證質(zhì)量全一致，即使是通過(guò)批批檢的項(xiàng)目其檢測(cè)結(jié)果也存在差異，因此必須選擇和訂購(gòu)長(zhǎng)批號(hào)的試劑，并保證保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號(hào)改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評(píng)估試劑的復(fù)雜過(guò)程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性；對(duì)于效期短、使用率低的試劑，應(yīng)當(dāng)小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，避免反復(fù)凍融造

細(xì)胞周期測(cè)定同位素標(biāo)記法方法分析2025/04/07: 同位素標(biāo)記法測(cè)定細(xì)胞周期：標(biāo)記有絲分裂百分率法(PLM)是一種常用的測(cè)定細(xì)胞周期時(shí)間的方法。其原理是對(duì)測(cè)定細(xì)胞進(jìn)行脈沖標(biāo)記、定時(shí)取材、利用放射自顯影技術(shù)顯示標(biāo)記細(xì)胞，通過(guò)統(tǒng)計(jì)標(biāo)記有絲分裂細(xì)胞百分?jǐn)?shù)的辦法來(lái)測(cè)定細(xì)胞周期。測(cè)定原理：①待測(cè)細(xì)胞經(jīng)3H-胸腺嘧啶核苷標(biāo)記后，所有S期細(xì)胞均被標(biāo)記。②S期細(xì)胞經(jīng)G2期才進(jìn)入M期，所以一段時(shí)間內(nèi)PLM=0。③開(kāi)始出現(xiàn)標(biāo)記M期細(xì)胞時(shí)，表示處于S期最后階段的細(xì)胞，已渡過(guò)G2期，所以從PLM=0到出現(xiàn)PLM的時(shí)間間隔為G2期的持續(xù)時(shí)間。④S期細(xì)胞逐漸進(jìn)入M期，PLM

細(xì)胞復(fù)蘇操作流程2025/03/31: 細(xì)胞復(fù)蘇是指將凍存在液氮里邊或者-80℃冰箱中的細(xì)胞解凍，再培養(yǎng)傳代。細(xì)胞復(fù)蘇應(yīng)采用快速融化的方法，這樣的目的是為了讓細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)融化，從而避免慢悠悠的融化，使得水分滲入細(xì)胞內(nèi)再結(jié)晶，從而對(duì)細(xì)胞再次造成傷害，從而影響細(xì)胞的存活率。細(xì)胞復(fù)蘇操作流程：1：細(xì)胞是凍在-80℃的環(huán)境里面的，所以拿出來(lái)后，應(yīng)該盡快去37℃水浴鍋里解凍（我一般是放在PE手套里面，然后在37攝氏度的水域上快速融化。）這一步的操作不要超過(guò)一分鐘！2：用預(yù)熱的培養(yǎng)基稀釋凍存的細(xì)胞（這步我會(huì)把融化的凍存液加入到15ml

聚合酶鏈PCR反應(yīng)技術(shù)的特點(diǎn)集合2025/03/24: 聚合酶鏈PCR反應(yīng)技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。聚合酶鏈PCR反應(yīng)技術(shù)的特點(diǎn)集合如下：1、特異性強(qiáng)決定PCR反應(yīng)特異性的因素有:①引物與模板DNA特異分子的正確結(jié)合;②堿基配對(duì)原則;③TaqDNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;④靶基因的特異性與保守性。其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,它取決于所設(shè)計(jì)引物的特異性及退火溫度。在引物確定的條件下,PCR退火溫度越高,擴(kuò)增的特異性越好。TaqDNA聚合酶的耐高溫性質(zhì)使反應(yīng)中引物能在較高的溫度下與模板退火

熒光定量PCR試劑盒使用范圍2025/03/17: 熒光定量PCR試劑盒使用范圍：1、核酸定量分析:對(duì)傳染性疾病進(jìn)行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的檢測(cè),比如近期流行的甲型H1N1流感，轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物基因拷貝數(shù)的檢測(cè)，RNAi基因失活率的檢測(cè)等。2、基因表達(dá)差異分析:比較經(jīng)過(guò)不同處理樣本之間特定基因的表達(dá)差異(如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等)，特定基因在不同時(shí)相的表達(dá)差異以及cDNA芯片或差顯結(jié)果的確證3、SNP檢測(cè):檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性對(duì)于研究個(gè)體對(duì)不同疾病的易感性或者個(gè)體對(duì)特定藥物的不同反應(yīng)有著重要的意義，因分子信標(biāo)結(jié)構(gòu)的巧妙性，一旦SNP

熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)內(nèi)標(biāo)（IC）簡(jiǎn)述2025/03/11: 熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)內(nèi)標(biāo)（InternalControl，IC）是指在同一反應(yīng)管中與靶序列共同擴(kuò)增的一段非靶序列分子。內(nèi)標(biāo)有兩種形式，一種是使用天然樣品中含有的內(nèi)參基因作為內(nèi)標(biāo)，另一種是人工添加的內(nèi)標(biāo)。內(nèi)標(biāo)的最大特點(diǎn)是與靶序列共同擴(kuò)增，而其他的對(duì)照都是獨(dú)立擴(kuò)增。1、內(nèi)參基因通常它們?cè)诟鹘M織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定，在檢測(cè)基因的表達(dá)水平變化時(shí)常用它來(lái)做參照物。內(nèi)參基因通常是持家基因（house-keepinggene）因?yàn)槠浔磉_(dá)水平受環(huán)境因素影響較小，而且在個(gè)體各個(gè)生長(zhǎng)階段的幾乎全部組織中持續(xù)表達(dá)變化

穩(wěn)定性好的抗體具有的特點(diǎn)是什么？2025/03/03: 抗體（antibody，Ab）是機(jī)體在體內(nèi)存在的外來(lái)分子、微生物等抗原物質(zhì)刺激下，由B淋巴細(xì)胞或記憶細(xì)胞增殖分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白（immunoglobulins，Ig），主要分布在血清中，也分布于組織液及外分泌液中。抗體在室溫、37℃保存與-20℃保存具有一樣的活性與穩(wěn)定性。穩(wěn)定性好的抗體具有的特點(diǎn)：1.抗體純度高純度的抗體產(chǎn)品，去除了包括各種蛋白酶在內(nèi)的雜質(zhì)，保證了抗體的穩(wěn)定性。采用先進(jìn)的抗體純化技術(shù)，確保抗體產(chǎn)品的高純度，保障其抗體產(chǎn)品的穩(wěn)定性。2.

試劑盒收到后使用說(shuō)明2025/02/24: 1、收到試劑盒后請(qǐng)注意事項(xiàng)：①收到試劑盒后，檢查外包裝有無(wú)破損，打開(kāi)試劑盒找到說(shuō)明書(shū)，按照說(shuō)明書(shū)中對(duì)于試劑種類和狀態(tài)的描述，清點(diǎn)試劑種類和數(shù)量是否正常。②按照說(shuō)明書(shū)的要求，把試劑放到對(duì)應(yīng)溫度的冰箱或者冷藏室保存。③收到試劑盒后，請(qǐng)盡快使用。為了保證測(cè)定質(zhì)量，試劑盒開(kāi)封后一般應(yīng)該在一個(gè)月內(nèi)用完。2、預(yù)實(shí)驗(yàn)①選擇2-3個(gè)預(yù)期差異比較大的樣品。②按照說(shuō)明書(shū)配制試劑，包括粉劑和自備試劑。注意：現(xiàn)配現(xiàn)用的試劑，一定要在檢測(cè)前再配置，避免試劑配制之后放置時(shí)間太久！③嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稱量、勻漿、離心、取樣、

PCR反應(yīng)主要成份之引物介紹2025/02/17: PCR反應(yīng)產(chǎn)物的特異性由一對(duì)上下游引物所決定。引物的好壞往往是PCR成敗的關(guān)鍵。引物設(shè)計(jì)和選擇目的DNA序列區(qū)域時(shí)可遵循下列原則：1、引物長(zhǎng)度約為16-30bp，太短會(huì)降低退火溫度影響引物與模板配對(duì)，從而使非特異性增高。太長(zhǎng)則比較浪費(fèi)，且難以合成。2、引物中G+C含量通常為40%-60%，可按下式粗略估計(jì)引物的解鏈溫度Tm＝4(G+C)+2(A+T)。3、四種堿基應(yīng)隨機(jī)分布，在3'端不存在連續(xù)3個(gè)G或C，因這樣易導(dǎo)致錯(cuò)誤引發(fā)。4、引物3'端最好與目的序列閱讀框架中密碼子第一或第二位核苷酸對(duì)應(yīng)，以

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