RTS BL21(DE3)Chaprone助溶表達(dá)感受態(tài)

商品屬性：

商品介紹：

描述：BL21(DE3) Chaprone 感受態(tài)細(xì)胞中含有分子伴侶蛋 白質(zhì)粒，其表達(dá)產(chǎn)物可協(xié)助重組蛋白正確折疊形成可溶活性 蛋白。分子伴侶蛋白質(zhì)粒為抗性（chloramphenicol， Cmr）的表達(dá)受控于四環(huán)素（tetR）操縱子，因此該感受態(tài) 不適用于抗性表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。 本品使用  的化學(xué)感受態(tài)技術(shù)制備， 其室溫可保存 3 天、-20°C 可保存 2 年（推薦保存溫度）、 -80°C 可長(zhǎng)期保存性能無下降。運(yùn)輸過程中無需干冰，可常 規(guī)冰袋運(yùn)輸（推薦運(yùn)輸溫度）。該感受態(tài)細(xì)胞為熱激感受態(tài) 細(xì)胞，轉(zhuǎn)用于蛋白表達(dá)（不可用于克隆和載體構(gòu)建），經(jīng) 42°C 熱激 1min 可獲得 105～106 cfu/μg 效價(jià)，可滿足質(zhì)粒轉(zhuǎn)化要 求。該制品使用簡(jiǎn)單、運(yùn)輸、儲(chǔ)存方便。 

組分
RTS BL21(DE3)Chaprone Competent Cell（10T） 1 瓶
Nano E.coli Transfection Reagent 1 mL
儲(chǔ)存：RTS 系列感受態(tài)為干粉形式，均可室溫保存 3 天，長(zhǎng)期保存-20°C（2 年）。經(jīng) Nano E.coli Transfection Reagent溶解后的感受態(tài)必須分裝后，并于-60°C 以下保存。溶解后的感受態(tài)細(xì)胞避免反復(fù)凍融，在-60°C 以下可保存 6 個(gè)月。
操作方法
1. 從-20°C 冰箱中取出 Nano E.coli Transfection Reagent融化，放置于冰上。取 300 μl Nano E.coli TransfectionReagent 加入到一支凍干感受態(tài)細(xì)胞中，并分裝到 10 支 1.5ml EP 管中（每支 30 μl），于-60°C 以下保存（或立即使用）。
2. 將 10～100 ng 質(zhì)粒 DNA（不可使用連接產(chǎn)物、不可使用篩選標(biāo)記質(zhì)粒）加入到分裝的感受態(tài)細(xì)胞中，輕彈EP 管（或槍頭輕輕吹打），置于冰上 15min。
3. 置于 42°C 熱激 1 min 后，迅速置于冰上急冷 2 min。
4. 熱激完畢后，向上述感受態(tài)細(xì)胞中加入 450 μL 不含抗生素的 SOC（或 LB）培養(yǎng)基，37 °C 振蕩（225 rpm）培養(yǎng)60 min。使質(zhì)粒上抗性標(biāo)記基因表達(dá)，菌體復(fù)蘇。
5. 取200 μl復(fù)蘇菌液涂布到含相應(yīng)抗生素的LB瓊脂平板表面。（含相應(yīng)質(zhì)粒抗生素和 20 μg/ml ）
6. 將平板置于 37 °C 培養(yǎng)，12~18 小時(shí)后可出現(xiàn)菌落。
7. 挑選生長(zhǎng)良好的菌落，接入 LB 培養(yǎng)基（含相應(yīng)質(zhì)粒抗生素，20 μg/ml），37 ℃劇烈振蕩培養(yǎng)過夜。
8. 1/50 比例接入新的 LB 培養(yǎng)基（含相應(yīng)質(zhì)粒抗生素，20μg/ml ，0.5 mg/ml L-阿拉伯糖）37 ℃劇烈振蕩培養(yǎng)至菌體密度 OD600 約 0.3（約 2h）。
9. 加入終濃度 2 ng/ml 四環(huán)素（誘導(dǎo) chaprone 伴侶蛋白表達(dá)），37℃劇烈振蕩培養(yǎng)至 OD600 約 0.5（約 2~4h）。
10. 加入適量 IPTG(0.1-1 mM), 15℃振蕩培養(yǎng) 24h（培養(yǎng)搖床無法制冷條件下，室溫誘導(dǎo) 8～12h）。
11. 4,000 rpm 室溫離心 15 min，收集細(xì)胞，進(jìn)行蛋白表達(dá)和可溶性表達(dá)分析。

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