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備試劑與收集血樣:
1. 收集標本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復凍融。
2. 標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
產品名稱 | 人雷帕霉素靶蛋白(mTOR)elisa進口試劑盒 |
英文名稱 | One target of rapamycin (mTOR) ELISA Kit |
貨號 | BJ-G10565 |
規格:96T/48T
特點:靈敏性高、特異性強、重復性好
用途:科研實驗等領域科學研究,不得用于臨床診斷
運輸:快遞(根據客戶要求,選擇具體的運輸方式)
試劑盒種屬:羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等等
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實驗前準備:
ELISA進口試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復: 根據抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫度達到 98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復,直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
P815小鼠肥大細胞瘤細胞 P815 mouse mastocytoma cell DMEM培養基+10%FBS異丁司特(標準品)質量規格:HPLC>99%,標準品Ibudilast
白細胞介素-10超家族吉西他濱質量規格:>98%,free baseGemcitabine
SF767(人腦瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 SHG44(膠質瘤細胞)沙利度胺(反應停)質量規格:>98%Thalidomide
CL-0052Caki-1(人腎透明細胞癌細胞)5×106cells/瓶×2沙利度胺(標準品)質量規格:HPLC>98%,標準品Thalidomide
TNFRSF18 Others Human 人 GI / TNFRSF18 人細胞裂解液 (陽性對照) 乙酰紫堇靈(標準品)質量規格:HPLC≥98%,標準品Acetylcorynoline
MN-c, 小鼠皮質神經元 Mouse藜蘆醛shēng huà shì jì容量:100克
T Others Human 人 ansthyretin / T / Prealbumin / PALB 人細胞裂解液 (陽性對照) 三溴酚 2,4,6-Tribromophqnol 118-79-6
人臍靜脈平滑肌細胞cDNAHUVSMC cDNA西蒙氏檸檬酸鹽培養基shēng huà shì jì容量:2~8℃50毫升
TSPAN8 Others Human 人 TSPAN8 / Teaspanin 8 / TM4SF3 人細胞裂解液 (陽性對照) 甲基-β-環糊精shēng huà shì jì容量:100克
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化);PC-12(低分化)135-55-72-羥基-7-磺酸鈉wo7ium 2-naphthol-7-sulfonate
HA Others H8N4 甲型流感 H8N4 (A/piail duck/Alberta/114/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) D-MANNOSED-甘露糖高級
Hep G2, 人肝癌細胞系2-安基本酚 2-cminophqnol 92-22-6
CD3D & CD3E Others Mouse 小鼠 CD3D & CD3E Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) M9MEDIUMBROTH,POWDERM9培養基肉湯生物技術級500GRT
人胚腎上皮細胞系;KiMA細胞色素C1克RT
KP-N-NS細胞,人腎上腺神經母細胞瘤細胞(腦轉移) 小鼠骨髓瘤細胞,P3/NSI/1-Ag4-1[NS-1]細胞 CL-0397NCI-H23(人非小細胞肺癌細胞)5×106cells/瓶×213922-41-31-基硼酸1-Naphthylboronic acid
人雷帕霉素靶蛋白(mTOR)elisa進口試劑盒大鼠肺血管平滑肌細胞*培養基 100mL苔酚葡萄糖苷;地衣二醇葡萄糖苷(標準品)Orcinol glucosid質量規格:HPLC≥97%,標準品
C6/36細胞,蚊子細胞 A-704(人腎癌細胞) 非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS5A;Vero-HCV-NS5A短葶山麥冬皂苷C(標準品)Liriope muscari baily saponins C質量規格:HPLC≥98%,標準品
NRG1 Protein Canine 重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (ECD)百兩金素A(標準品)Ardisiacrispin A質量規格:HPLC≥98%,標準品
L-O2(人正常肝細胞) 5×106cells/瓶×2 角膜上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)柳穿魚黃素(標準品)Pectolinarigenin質量規格:HPLC≥98%,標準品
腎系膜細胞培養基MCM-prf瓜子金皂苷己(標準品)Polygalasaponin F質量規格:HPLC≥98%,標準品
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