細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：H9細胞專用因子Y27632（相關3）    

產(chǎn)品規(guī)格：1mg

貨號：FS-01X9934

保存溫度（℃）：/-20℃

運輸溫度（℃）：/-20℃(干冰)   

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

注意事項：

 Cyclical Citrullinated Peptide (CCP)環(huán)胍(CCP)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Cadherin, Osteoblast (CDHOB)造骨細胞鈣黏蛋白(CDHOB)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Anti-Filaggrin Antibody (AFA)抗絲聚蛋白(AFA)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Antidiuretic Hormone (ADH)抗利尿(ADH)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Anti-Ovarian Antibody (AOAb)抗卵巢抗體(AOAb)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Anti-Type II Collagen Antibody (Anti-CIIAb)抗Ⅱ型膠原蛋白抗體(Anti-CⅡAb)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Nucleoporin 153kDa (NUP153)153kDa核孔蛋白(NUP153)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Mitogen Activated Protein Kinase Kinase Kinase 1 (MAP3K1)絲裂原激活蛋白激激激1(MAP3K1)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Anti-OJ Antibody抗OJ抗體(Anti-OJ)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Anti-Histone Antibody (AHA)抗組蛋白抗體(AHA)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Phospholipase A1 (PLA1)磷脂A1(PLA1)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Nucleoporin 133kDa (NUP133)133kDa核孔蛋白(NUP133)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Fibrinogen Alpha (FGa)纖維蛋白原α(FGα)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Mitogen Activated Protein Kinase 8 (MAPK8)絲裂原激活蛋白激8(MAPK8)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Nucleoporin 155kDa (NUP155)155kDa核孔蛋白(NUP155)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Tetraspanin 27 (TSPAN27)四旋蛋白27(TSPAN27)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Caspase 10 (P10)胱天蛋白10(P10)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Thioredoxin Binding Protein 2 (TBP2)硫氧還蛋白結合蛋白2(TBP2)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
H9細胞專用因子Y27632（相關3）SKP1  S期激相關蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml

SHFM3  SHFM3蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

ROC1/RNF75  環(huán)指蛋白75抗體規(guī)格: 0.2ml

RIT1  RIT1蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

FbxW2  FbxW2蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

Fbxw7/CDC4  Fbxw7蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

FBXW8/FBXO29  FBXW8蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

Fbx15  Fbx15蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。