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產(chǎn)地	國產(chǎn)	加工定制	是
適用領域	科研	貨號	FS-02X0065

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：PBS緩沖液

英文名稱：PBS

貨號：FS-02X0065

規(guī)格：500ml

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。

注意事項：

1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。

2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。

3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。

4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。

5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。

6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。

7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

Matrix Metalloproteinase 8 (MMP8)基質金屬蛋白8(MMP8)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

Nerve Growth Factor (NGF)神經(jīng)生長因子(NGF)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

Microsomal Glutathione S Transferase 2 (MGST2)微粒體谷胱甘S轉移2(MGST2)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

Plasminogen Activator Inhibitor 1 (PAI1)纖溶原激活物抑制因子1(PAI1)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

Nerve Growth Factor (NGF)神經(jīng)生長因子(NGF)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

Neurotrophin 3 (NT3)神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

Osteoprotegerin (OPG)骨保護(OPG)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

Creatine Kinase, Muscle (CKM)肌肌激(CKM)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

Cathepsin L (CTSL)組織蛋白L(CTSL)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

Cathepsin L (CTSL)組織蛋白L(CTSL)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
PBS緩沖液C1orf180/AIDA 1號染色體開放閱讀框80抗體規(guī)格: 0.2ml

APP/ABPP APP/ABPP淀粉樣前體蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml

APP695 (CT) 淀粉樣前體蛋白抗體（C端）規(guī)格: 0.1ml

EML4/C2orf180 限制過度增殖相關蛋白EML4抗體規(guī)格: 0.2ml

C2orf24 2號染色體開放閱讀框24抗體規(guī)格: 0.2ml

C2orf18/ANT2BP 2號染色體開放閱讀框18抗體規(guī)格: 0.2ml

APR3/C2orf28 凋亡相關蛋白3抗體規(guī)格: 0.2ml

ECRG4/C2orf40 食道癌相關基因4蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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