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ACP酸性磷酸酶檢測試劑盒微量法

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-04-11 14:14:16瀏覽次數(shù):172次

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貨號 FS-01S63428
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公司產(chǎn)品僅用于科研提供的生化試劑盒,質(zhì)量信得過產(chǎn)品,售后完善。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位,竭誠為您提供更周到的服務(wù)更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品。

產(chǎn)品名稱:ACP酸性磷酸酶檢測試劑盒微量法

規(guī)格:100管/48樣

檢測方法:微量法

貨號:FS-01S63428
商品介紹:

測定意義

ACP在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱無機(jī)磷酸,常見于巨噬細(xì)胞的溶酶體內(nèi)。ACP常用于前列腺癌的輔助診斷。

測定原理:

在酸性環(huán)境中,ACP催化磷酸苯二鈉水解生成苯,苯與4-氨基安替和鐵化鉀反應(yīng)生成紅色亞醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通過測定510nm吸光度增加速率,來計(jì)算ACP活性。

自備儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;

試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
QQ截圖20220307153604.png

粗酶液提取:

1、細(xì)胞或組織樣品的制備:

培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液),超聲波破碎細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進(jìn)行檢測。

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兔組織多肽抗原(TPA)聯(lián)免疫試劑盒克魯維畢赤酵母Tri-Methyl-Histone H3 (Lys27) (C36B11) Rabbit mAb

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L1粘附分子(L1CAM/CD171)聯(lián)免疫試劑盒 扣囊復(fù)膜孢酵母SMYD2 (D14H7) Rabbit mAb
ACP酸性磷酸酶檢測試劑盒微量法氧化鎘 CP,98.5%膽 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.0%MHC- II /H-2 II (Mouse major histocompatibility complex- II ) ELISA Kit  小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類

氧化鎘 99.99% metals basis氯標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.117mg/ml,基體:異辛烷sEPCR(Mouse soluble endothelial protein C receptor) ELISA Kit  小鼠可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體

剛果紅 AR鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液 100µg/mL,基體:水MECF(ouse eosinophil chemotactic factor) ELISA Kit  小鼠嗜粒趨化因子

剛果紅 ACS屈標(biāo)準(zhǔn)溶液 3.58μg/mL,基體:甲Eotaxin 1/CCL11(Mouse Eotaxin 1) ELISA Kit  小鼠嗜粒趨化蛋白

剛果紅 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥97.0% (HPLC)對硝基氯標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.02mg/ml,基體:甲E-Selectin/CD62E(Mouse E-Selectin) ELISA kit  小鼠E選擇

化亞銅 AR 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%(HPLC)FAS/CD95(Mouse Factor-related Apoptosis) ELISA Kit  小鼠凋亡相關(guān)因子

化亞銅 CP氯菊酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.7%Mouse Slit2 ELISA Kit   小鼠Slit2

甲紅 Indicator百菌清 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%A Beta1-42(Mouse amyloid beta peptide 1-42) ELISA Kit  小鼠β淀粉樣蛋白1-42

 


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