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貨號	BJ-016111-2

特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。

產(chǎn)品名稱	檢測方法	規(guī)格	貨號
輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法	可見分光光度法	50管/24樣	BJ-016111-2

商品介紹:

測定意義

輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環(huán)（TCA）的主要?dú)涫荏w，生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時，形成大量的ROS，同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細(xì)胞呼吸耗氧量較高，處于過氧化狀態(tài)。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外，NAD+降解產(chǎn)物對細(xì)胞信號傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。

測定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，NADH通過PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍(lán)（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測吸光值；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進(jìn)一步采用MTT還原法檢測。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計、臺式離心機(jī)、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

優(yōu)點(diǎn)如下：

1、快速簡便：全程約50分鐘，可測100例左右樣本。

2、取樣量微：本法取手指或耳垂等末梢血20ul～50ul即可測紅細(xì)胞中的SOD，只需2ml靜脈血可測白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD，只需50mg左右組織就可測組織勻漿、胞漿中的SOD，0.2g組織可測線粒體及微粒體中的SOD。

3、靈敏度高：IC50=0.05g/ml，是鄰苯三酚法的18倍。

4、穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放6個月有效。

5、再現(xiàn)性好：變異系數(shù)CV=1.7%。

6、回收試驗(yàn)： X =103.3%。

7、受外界影響因素小：干擾因素少，重復(fù)性強(qiáng)。

8、測試面廣：可測動物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等，效果均佳。

測定步驟：

1、酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm。

2、試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋50倍，用多少配多少。（試劑三和蒸餾水1：49稀釋。

3、工作液配制：在試劑一加入100μl試劑二，充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。（若一次性測定樣本較少，可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml：0.1ml的比例混勻配制）

4、將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解（溶解后一周內(nèi)用完）。

5、樣本測定（在96孔板中依次加入下列試劑）充分混勻，室溫靜置30min后，450nm處測定各管吸光值A(chǔ)。

注意事項(xiàng)：

待測樣品-70℃可保存1個月。需注意反復(fù)凍融會導(dǎo)致SOD部分失活。

一個試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢，其中的WST-8需要在使用時適當(dāng)分裝，以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的檢測效果下降。

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時所用的稀釋液應(yīng)盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時，標(biāo)準(zhǔn)品也宜使用SOD樣品制備液進(jìn)行稀釋；當(dāng)樣品為血液等無需處理的樣品時，宜使用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。

抗氧化物會對本試劑盒的檢測產(chǎn)生干擾，例如0.1mM ascorbic acid，5mM GSH都會使測定出來的吸光度顯著升高。此時盡管樣品沒有顏色，如果設(shè)置了使用說明中的空白對照3，就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。

輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒輔酶Ⅱ系列 50管/24樣可見分光光度法

NAD激酶（NADK）測試盒輔酶Ⅱ系列 100管/48樣微量法

NAD激酶（NADK）測試盒輔酶Ⅱ系列 50管/24樣可見分光光度法

NADP磷酸酶（NADPase）測試盒輔酶Ⅱ系列 100管/96樣微量法

NADP磷酸酶（NADPase）測試盒輔酶Ⅱ系列 50管/48樣可見分光光度法

6磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）/葡萄糖6磷酸脫氫酶測試盒輔酶Ⅱ系列 100管/96樣微量法

6磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）/葡萄糖6磷酸脫氫酶測試盒輔酶Ⅱ系列 50管/48樣紫外分光光度法

胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測試盒輔酶Ⅱ系列 100管/96樣微量法

胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測試盒輔酶Ⅱ系列 50管/48樣紫外分光光度法

NADP蘋果酸酶（NADPME）測試盒輔酶Ⅱ系列 100管/96樣微量法

NADP蘋果酸酶（NADPME）測試盒輔酶Ⅱ系列 50管/48樣紫外分光光度法

NAD蘋果酸酶（NADME）測試盒輔酶Ⅱ系列 100管/96樣微量法

NAD蘋果酸酶（NADME）測試盒輔酶Ⅱ系列 50管/48樣紫外分光光度法

6磷酸葡萄糖酸脫氫酶（6PGDH）測試盒輔酶Ⅱ系列 100管/96樣微量法

6磷酸葡萄糖酸脫氫酶（6PGDH）測試盒輔酶Ⅱ系列 50管/48樣紫外分光光度法

肌酸激酶(CK)測試盒輔酶Ⅱ系列 100管/96樣微量法

肌酸激酶(CK)測試盒輔酶Ⅱ系列 50管/48樣紫外分光光度法

脂肪酸合成酶（FAS）測試盒輔酶Ⅱ系列 100管/96樣微量法

脂肪酸合成酶（FAS）測試盒輔酶Ⅱ系列 10管/9樣紫外分光光度法

脂肪酸合成酶（FAS）測試盒輔酶Ⅱ系列 25管/24樣紫外分光光度法

脂肪酸合成酶（FAS）測試盒輔酶Ⅱ系列 50管/48樣紫外分光光度法

AIMP2抗體

乙酰酶抗體

5-氨基乙酰丙酸合酶1抗體

防御素α1/3抗體

ABC膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體

植物延長蛋白

A-Raf抗體

磷酸化A-Raf抗體

紅細(xì)胞腺苷脫氨酶3抗體

雄激素結(jié)合蛋白抗體

肝再生增強(qiáng)因子抗體

APP/ABPP淀粉樣肽前體蛋白抗體

甲胎蛋白單克隆抗體

ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白1抗體

芳香烴受體抗體

吸引素抗體

腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗體

蛋白激酶B2

輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法血管生成素2抗體

芳香化酶/細(xì)胞色素P450/雌激素合成酶抗體

腺苷A2A受體抗體

蛋白激酶A錨定蛋白95抗體

頂膜鈉依賴性膽鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體

實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：

一、肝素的配制：

市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。

肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集：

全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。

選擇抗凝的注意點(diǎn)：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后