當前位置:上海莼試生物技術有限公司>>細胞培養>>原代細胞>> T25m2大鼠胎兒表皮角質形成層細胞操作
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。
產品名稱 | 大鼠胎兒表皮角質形成層細胞操作 |
規格 | T25m2 |
貨號 | CS-963928 |
大鼠胎兒表皮角質形成層細胞【Rat Embryo: Normal Fetal Epidermal Keratinocytes】產品描述:提供的原代細胞均來自新鮮組織,用于培養該細胞的組織采集是根據國際標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質量的穩定。在生物技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態,進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。
發貨:客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養瓶和相應的細胞密度。提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發貨的新鮮細胞還包含:1、發貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養基;2、說明書及注意事項;3、售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養箱內靜置后2-3h,再進行后續的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預熱培養基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養基重懸細胞后轉入T25培養瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養箱中培養(培養瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養基給細胞換液后繼續培養。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
大鼠組胺(HIS)ELISA檢測試劑盒RatHistamine,HIS 96T/48T 氯化銫 Cesium chloride 質量規格:>99%,分子生物學級
大鼠組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA檢測試劑盒Rathiston-H2b 96T/48T 氫二鈉七水 phosphate, dibasic, heptahydrate 質量規格:>98%,BR
大鼠組織蛋白酶K(cath-K)ELISA檢測試劑盒RatCathepsinK,cath-K 96T/48T dATP溶液(100 mM) dATP 100 mM solution 質量規格:>97%,BR
大鼠組織蛋白去乙?;?/span>(HD)ELISA檢測試劑盒RatHistoneDeacetylase,HD 96T/48T 癸酸鈉 decanoate 質量規格:>99%,進分
大鼠組織多肽抗原(TPA)ELISA檢測試劑盒RatTissuePolypeptideAigen,TPA 96T/48T 瓊脂糖(美侖電泳級) Agarose 質量規格:美侖,電泳級
大鼠組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA檢測試劑盒RatTissue-typePlasiminogenActilyse,t-PA 96T/48T 瓊脂糖(Sigma) Agarose 質量規格:Sigma原裝
大鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA檢測試劑盒RatTissuefactorpathwayinhibitor,TFPI 96T/48T 植物血凝素 Phytohemagglutinin 質量規格:BR
大蒜*培養基500毫升溶液/片劑 6-糠基氨基嘌呤,激動素 Kinetin,6-Furfurylaminopurine 質量規格:>98%,BR
大巖筒(gloxinia)增殖培養基500毫升溶液/片劑 乙二醇雙(2-氨基乙基醚)四乙酸 EGTA, egtazic acid 質量規格:>98%,分子生物學級
單胺氧化酶系列高通量篩選熒光檢測試劑盒500 無水二氫鈉(分子生物學級) phosphate, monobasic, anhydrous 質量規格:>98.5%,分子生物學級
Humandynamin2,DNM2ELISAKit 人發動蛋白2(DNM2)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 DL-蘋果酸 DL-Malic acid 質量規格:>98%,BR
Human11-dehydro-thromboxaneB2,11-DH-TXB2ELISA試劑盒人11去氫血栓烷B2(11-DH-TXB2)ELISA試劑盒規格:96T/48T 硫酸亞鐵七水(AR) Iron(II) sulfate, heptahydrate 質量規格:AR,>99%
真菌/酵母細胞線粒體分離(活性)試劑盒10 三鉀 Potassium phosphate, tribasic 質量規格:>98%
MouseAquaporin4,AQP-4ELISAKit小鼠水通道蛋白4(AQP-4)ELISA試劑盒規格:96T/48T 鈣黃綠素二鈉鹽 Calcein, salt 質量規格:IND grade
小鼠牛小腸堿性0酸酶(CIAP)ELISA試劑盒 ,英文名: CIAP ELISA Kit 植酸鈉 Phytic acid dodeca salt hydrate 質量規格:>98%,BR
小鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA檢測試劑盒MouseN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit 96T/48T 菊粉;菊糖 Inulin from chicory 質量規格:>90%,BR
人肺炎衣原體抗體(Cpn-Ab)試劑盒 Human Chlamydia pneumoniae aibody,Cpn-Ab ELISA Kit 孔雀綠 Malachite green 質量規格:IND grade
RatLeptin,LEPELISAKit大鼠瘦素(LEP)ELISA試劑盒規格:96T/48T 聚乙二醇2000 PEG 2000 質量規格:M.W:2000
COLLAGENII蛋白共沉淀分析試劑盒5 硫代氨基脲(AR) Thiosemicarbazide 質量規格:AR,>98%
MouseMyoglobin,MYO/MBELISA試劑盒小鼠肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒規格:96T/48T 氯化亞鐵四水(AR) Iron (II) chloride, tetrahydrate 質量規格:AR,>99%
大鼠胎兒表皮角質形成層細胞操作頂體形態刀A凝集素熒光標記(ConA-FITC)染色試劑盒20 靈芝酸 B Ganoderic acid B 質量規格:HPLC≥98%,標準品
頂體形態花生凝集素熒光標記(PNA-FITC)染色試劑盒20 靈芝醛A(標準品) Ganoderal A 質量規格:HPLC≥95%,標準品
頂體形態豌豆凝集素熒光標記(PSA-FITC)染色試劑盒20 靈芝醛A HPLC≥98% 20mg
動物扁桃腺組織細胞分離培養試劑盒10 靈芝內酯B HPLC≥98% 20mg
動物垂體組織細胞分離培養試劑盒10 靈芝馬酮 HPLC≥98% 5mg
動物單酚氧化酶(monophenolase)活性比色法定量檢測試劑盒20 靈芝醇F HPLC≥98% 5mg
動物單核白細胞/細胞分離試劑盒10 靈芝醇A HPLC≥98% 5mg
動物多酚氧化酶(polyphenoloxidase;PPO)活性比色法定量檢測試劑盒20 靈芝醇 B HPLC≥98% 5mg
動物多核白細胞分離試劑盒10 膦酰二肽鈉 Phosphoramidon di salt 質量規格:0.99
動物二酚氧化酶(diphenolase)活性比色法定量檢測試劑盒20 磷脂酶A2激活肽 Phospholipase A2 ActivatingPeptide 質量規格:>95%,BR
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