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硼酸鹽緩沖液(BBS,pH8.0)500ml實(shí)驗(yàn)方法

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硼酸鹽緩沖液(BBS,pH8.0)500ml實(shí)驗(yàn)方法SW 1990(人胰腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

C57BL/6小鼠胚胎干細(xì)胞 C57BL/6 mouse embryonic stem cells

BST2 Others Human TETHERIN / BST2 / CD317 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

Hp2/o細(xì)胞,人跟骨髓瘤細(xì)胞 赭曲霉 人胚肺成纖維細(xì)胞;HFL-I

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY1008

HGC-27(人胃癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(EGFP標(biāo)記) 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC-C

硼酸鹽緩沖液(BBS,pH8.0)500ml實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1.微量試劑取用前請(qǐng) 離心集液。
27-AAD避光保存及使用。
37-AAD為潛在致癌物,操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測(cè)組織樣本。
硼酸鹽緩沖液(BBS,pH8.0)500ml實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)515min
3.加入500μL1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對(duì)于貼壁細(xì)胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng),用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對(duì)照組;
2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
3)在500μL 1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
5)避光、室溫反應(yīng)5 min
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm,發(fā)射波長(zhǎng)647 nm7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè),激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
硼酸鹽緩沖液(BBS,pH8.0)500ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí),注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTACa2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer
2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時(shí)間不宜過長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心510分鐘,收集細(xì)胞;
3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS4)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心510分鐘,洗滌細(xì)胞;
4)加入300μL 1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
5Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μLAnnexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
6PI標(biāo)記:上機(jī)前5分鐘再加入5μLPI染色。
7)上機(jī)前,補(bǔ)加200μL1×Binding Buffer
人腎癌細(xì)胞;A498

ERBB3 Others Human HER3 / ErbB3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

CM-R042大鼠直腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

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COS-1(非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

CCL1 Others Human CCL1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
SLAMF1 Others Rat 大鼠 CD150 / SLAM / SLAMF1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人氣管上皮細(xì)胞cDNAHTEpiC cDNA

tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B);F9-CAG-tTA-3A1

QGY-7703細(xì)胞,人肝癌細(xì)胞 人羊膜細(xì)胞,WISH細(xì)胞 大鼠骨肉瘤細(xì)胞;UMR-106

KLE(人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

Promocell C-28010 Mesenchymal Stem CellGrowth Medium, 間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基(即用型) 500ml
大鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人糖盞蛋白免疫試劑盒 Human Glycocalicin ELISA kit

細(xì)胞色素b5含量測(cè)試盒 可見分光光度法 50/48

RatStromalcellderivedfactor1β,SDF-1βELISA試劑盒大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

Humankillercelllectin-likereceptor,KLRELISA試劑盒人殺傷細(xì)胞凝集素樣受體(KLR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

HumanNeuroglobin,NGBELISAKit人腦紅蛋白(NGB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔子B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

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HumanFetuinA,FETU-AELISA試劑盒人胎球蛋白A(FETU-A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

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HumanN-terminalextein,Ext-NELISAKitN端外顯肽(Ext-N)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
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CC趨化因子受體1(CCR1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白ε(C/EBPε)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

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