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更新時間:2017-07-17 13:05:22瀏覽次數(shù):226次
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dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存詳細說明書:
dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存產(chǎn)品及特點:
易錯 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當?shù)倪x擇方法,則可從構建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設計位點,則可使產(chǎn)物克隆到表達載體,也可以用于體內蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴增。
dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存變性溫度與時間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達不到變 性溫度就不會產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設為 94℃ 20~30 秒,高溫時間應盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95℃。 退火溫度與時間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強,但過高則引物 不能與模板牢固結合.
dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存DNA 擴增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68℃之間。設置特定反應的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C)%含量進行推測,一般實驗中退火溫度比擴增引 物的熔解溫度 Tm 低 5℃,退火時間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結 合,長時間退火沒有必要。
dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存使用方法:
1. 以 30 uL 的標準 PCR 反應體系為例,如果反應體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯 PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結束后做延伸處理。
15-keto Prostaglandin E2 (1 mg) 9,15-dioxo-11α-hydroxy-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid; 15-keto PGE2; 15-keto Prostaglandin E2
Ritalinic Acid (50 mg) α-
腐胺(10GM) Putrescine, Dihydrochloride, 333-93-7; MW 161.08
4(Z),7(Z)-Decadienoic Acid-d5 (1 mg) (4Z,7Z)-deca-4,7-dienoic-9,9’,10,10,10-d5 acid; 4(Z),7(Z)-Decadienoic Acid-d5
S-nitnoso-L-glutathione (50 mg) N-(N-L-。gamma。-glutamyl-S-nitnoso-L-cysteinyl)-glycine; GSNO; S-nitnoso-L-glutathione
Methyl -5-((2-t-butylcarbamothioyl)hydrazono)methyl)-1-(2,4-difluorophenyl)-1H-pyrazole-4-carboxylate CID 2745687
PtdIns-(3,4,5)-P3 (1,2-dipalmitoyl) (sodium salt) (1 mg) 1-(1,2R-dihexadecanoylphosphatidyl)inositol-3,4,5-trisphosphate, tetrasodium salt; Phosphatidylinositol-3,4,5-triphosphate C-16|DPPI-3,4,5-P3; PtdIns-(3,4,5)-P3 (1,2-dipalmitoyl) (sodium salt)
TAK-632 (5 mg) N-[5-[[7-cyano-2-[(cyclopropylcarbonyl)amino]-6-benzothiazolyl]oxy]-2-fluorophenyl]-3-(trifluoromethyl)-benzeneacetamide
CP 80633 (10 mg) 5-[3-[(1S,2S,4R)-bicyclo[2。2。1]hept-2-yloxy]-methoxyphenyl]tetrahydro-2-(1H)-pyrimidinone; CP 80633
BAY-11-7085 (50 mg) 3-[[4-(1,1-dimethylethyl)phenyl]sulfonyl]-2E-propenenitnile
Fast Green FCF (5 g) N-ethyl-N-[4-[[4-[ethyl[(3-sulfophenyl)methyl]amino]phenyl](4-hydroxy-2-sulfophenyl)methylene]-2,5-cyclohexadien-1-ylidene]-3-sulfo-benzenemethanaminium, disodium salt; NSC 379443; Fast Green FCF
DiaEasy Dialyzer (15 ml) MWCO 12-14 kDa DiaEasy Dialyzer (15 ml) MWCO 12-14 kDa
13(R)-HODE cholesteryl ester (50 ug) 13R-xy7noxy-9Z,11E-octadecadienoic acid, cholesteryl ester; 13(R)-HODE cholesteryl ester
LAQ824 (5 mg) Dacinostat|NVP-LAQ824; (2E)-N-xy7noxy-3-[4-[[(2-xy7noxyetxyl)[2-(1H-indol-3-yl)etxyl]amino]metxyl]pxenyl]-2-propenamide
DiSBAC30111 DiSBAC30111
Levetiracetam (100 mg) (αS)-etxyl-2-oxo-1-pyrrolidineacetamide; UCB-L 059|Kea ; Levetiracetam
Dihomo-γ-Linolenic Acid etxyl ester (500 mg) 8Z,11Z,14Z-eicosatrienoic acid, etxyl ester; etxyl DGLA; Dihomo-γ-Linolenic Acid etxyl ester
3-Decanone, 5-xy7noxy-1-(4-xy7noxy-3-metxoxypxenyl)-, (5S)-, 5-xy7noxy-1-(4-xy7noxy-3-metxoxypxenyl)-3-decanone 6-Gingerol
沙氏葡萄糖瓊脂250g用于化妝品中白色念球菌分離培養(yǎng)
乳糖復發(fā)酵培養(yǎng)基(乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基) 1000(g) incubation media 乳糖復發(fā)酵培養(yǎng)基(乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基) 1000(g)
TCBS瓊脂 TCBS Agar 250克 用于霍亂、副溶弧菌的分離培養(yǎng)
醋酸鉛培養(yǎng)基250用于硫化氫試驗incubationmedia醋酸鉛培養(yǎng)基250用于硫化氫試驗
MIO培養(yǎng)基 250g 用于動力、吲哚和*試驗(FDA方法)
AntibioticAgar
酪胨-*-吐溫20液體培養(yǎng)基基礎 250(g) incubation media 酪胨-*-吐溫20液體培養(yǎng)基基礎 250(g)
KORSER氏檸檬酸鹽肉湯 Korser Citrate Sodium Broth 100克 用于細菌的枸櫞酸鹽試驗
四環(huán)素檢定瓊脂250用于四環(huán)素殘留的微生物學檢定(SN標準)incubationmedia四環(huán)素檢定瓊脂250用于四環(huán)素殘留的微生物學檢定(SN標準)
WagstsumaAgarBase
dNTP 溶液 ,10mM0.5mL保存MCP瓊脂250g用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的計數(shù)和培養(yǎng)
Baird-Parker瓊脂基礎 Baird-Parker Agar Base 用于*的選擇性分離培養(yǎng)(GB、SN標準)
布氏菌選擇性培養(yǎng)基 Brucella Selective Medium 250 用于布氏菌的選擇性分離培養(yǎng)
YM肉湯250g/瓶用于霉菌、酵母菌和其它耐酸菌的培養(yǎng)incubationmediaYM肉湯250g/瓶用于霉菌、酵母菌和其它耐酸菌的培養(yǎng)
LactoseBroth
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