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常用PCR引物100uL保存

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更新時間:2017-07-18 12:20:07瀏覽次數:800次

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常用PCR引物100uL保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。

 

常用PCR引物100uL保存產品及特點:
易錯 PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當的選擇方法,則可從構建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規 PCR 的比較如下:本產品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發,本產品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的*性。
2. 配方經過精心優化,突變率穩定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設計位點,則可使產物克隆到表達載體,也可以用于體內蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續易錯 PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產物,對于 1kb 以上的產物,建議分段擴增。
常用PCR引物100uL保存變性溫度與時間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達不到變 性溫度就不會產生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復性,因而減少產量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設為 94 20~30 秒,高溫時間應盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95 退火溫度與時間:退火溫度決定 PCR 特異性與產量。溫度高特異性強,但過高則引物 不能與模板牢固結合.
常用PCR引物100uL保存DNA 擴增效率下降;
溫度低產量高,但過低可造成引物與模板 錯配,非特異性產物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設置特定反應的 適退火溫度,可根據引物的(G+C%含量進行推測,一般實驗中退火溫度比擴增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結 合,長時間退火沒有必要。
常用PCR引物100uL保存使用方法:
1. 30 uL 的標準 PCR 反應體系為例,如果反應體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補水到 30 uL
2.
按已經優化的 PCR 條件進行一定循環數的 PCR(循環數與突變率的關系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯 PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結束后做延伸處理。
Prostaglandin F2α methyl ester 5 mg     9alpha。,11alpha。,15S-trihydroxy-prosta-5Z13E-dien-1-oic acid methyl ester PGF2α methyl ester Prostaglandin F2α methyl ester

Dibutyryl-cGMP sodium salt 50 mg     Dibutyryl Guanosine 3,5-cyclic monophosphate N-1-oxobutyl-cyclic 3,5-hydrogen phosphate 2-butanoate guanosine, monosodium salt

七水流亞鐵(1KG     Ferrous Sulfate 7H2O 7782-63-0 99.5%

Metyrapone 1 g     2-

7Z),11Z-Nonacosadiene 5 mg     7Z11Z-nonacosadiene 7Z),11Z-Nonacosadiene

Biotinyl-Ala-Ser-Thr-DL-Asp-Fluoromethylketone Biotinyl-ASTD-Fluoromethylketone     Biotinyl-ASTD-FMK
FFA Assay Enzyme Mixture 1 ea     FFA Assay Enzyme Mixture

*標記*基化組蛋白H3K27多肽     Biotinylated Trimethyl Histone H3K27 Peptide 200 ul

Tamoxifen 5 g     2-[4-[1Z-12-diphenyl-1-buten-1-yl]phenoxy]-NN-dimethyl-ethanamine Tamoxifen

4-fluoro-α-Pyrrolidinopentiophenone hydrochloride 10 mg     4-fluoro-α-2-1-pyrrolidinyl-Valerophenone|4-fluoro-α-PVP 1-4-fluorophenyl-2-1-pyrrolidinyl-1-pentanone, monohydrochloride

Fluorouracil 25 g     5-fluoro-241H3H-pyrimidinedione NSC 19893|Ro 2-9757|U-8953 Fluorouracil

PtdIns--3,5)-P2 -1,2-dioctanoyl) -sodium salt) (5 mg)     DOPI-3,5-P2|Phosphatidylinositol-3,5-bisphosphate C-8, PtdIns--3,5)-P2 -1,2-dioctanoyl) -sodium salt), 1-(1,2-dioctanoylphosphatidyl)inositol-3,5-bisphosphate, trisodium salt
Cell-Based Assay Calcein AM 1000X 1 ea     Cell-Based Assay Calcein AM 1000X

R-ketemine xy7nochloride 10 mg     2R-2-2-chloropxenyl-2-metxylamino-cyclohexanone, monoxy7nochloride

Amplite Red HRP底物     Amplite Red HRP Substrate

CAY10581 10 mg     (±)34-dixy7no-3-xy7noxy-22-dimetxyl-4-[pxenylmetxylamino]-2H-naphtho[23-b]pyran-510-dione CAY10581

Palmitoyl N-Isopropylamide 100 mg     N-isopropyl-hexadec* PIA Palmitoyl N-Isopropylamide

N1-4-chloropxenyl-6-metxyl-N5-[3-9H-purin-6-yl-2-pyridinyl]- 15-Isoinoneolinediamine     B-Raf Inhibitor 1
Bufferedglycerol-SodiumChlorideSolution

鹽*增菌液(SC) Selenite Cystine Broth 用于沙門氏菌選擇性增菌培養(GBSN標準)

月示胨 Proteose peptone 250 培養基原材料,為營養要求高的細菌生長提供營養

Bolton肉湯基礎250g/瓶用于彎曲菌選擇性增菌,每培養基中添加070ubationmediaBolton肉湯基礎250g/瓶用于彎曲菌選擇性增菌,每培養基中添加0701

BDSMedium
大腸桿菌顯色培養基CRM002l大腸桿菌顯色培養基用于大腸桿菌的快速檢測和計數

L-Trptophan L-* Japan 25g incubation media L-Trptophan L-* Japan 25g

靈芝(紅芝,赤芝) 降低糖蜜廢水 /

鹽胱酸增菌液(SC)20/包用于沙門氏菌選擇性增菌培養

*酶制備培養基
常用PCR引物100uL保存BLAgarMedium

42℃生長培養基 42growth Medium 用于副溶血性弧菌42℃生長試驗(SN標準)

無菌豬血清 Sterile Defidrinated Pig Blood 100毫升 BR

改良GAM瓊脂基礎250g/瓶用于厭氧菌培養,每培養基中添加22可選擇性添加222ncubationmedia改良GAM瓊脂基礎250g/瓶用于厭氧菌培養,每培養基中添加22可選擇性添加2221

MI培養基 1000ml 用于濾膜法計數飲用水中大腸埃希氏菌和大腸菌群

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