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PCR Mix 染料10mL保存

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更新時間:2017-07-17 13:18:03瀏覽次數:192次

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PCR Mix 染料10mL保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。

PCR Mix 染料10mL保存使用方法:
1. 30 uL 的標準 PCR 反應體系為例,如果反應體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補水到 30 uL
2.
按已經優化的 PCR 條件進行一定循環數的 PCR(循環數與突變率的關系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯 PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結束后做延伸處理。
PCR Mix 染料10mL保存產品及特點:
易錯 PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當的選擇方法,則可從構建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規 PCR 的比較如下:本產品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發,本產品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的*性。
2. 配方經過精心優化,突變率穩定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設計位點,則可使產物克隆到表達載體,也可以用于體內蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續易錯 PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產物,對于 1kb 以上的產物,建議分段擴增。
PCR Mix 染料10mL保存DNA 擴增效率下降;
溫度低產量高,但過低可造成引物與模板 錯配,非特異性產物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設置特定反應的 適退火溫度,可根據引物的(G+C%含量進行推測,一般實驗中退火溫度比擴增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結 合,長時間退火沒有必要。
PCR Mix 染料10mL保存詳細說明書:

Sulprostone 1 mg     N-methylsulfonyl-9-oxo-11alpha。,15R-dihydroxy-16-phenoxy-17181920-tetranor-prosta-5Z13E-dien-1-amide Sulprostone

5-Cyano-2,3-di-p-tolyltetrazolium chloride 25 mg     CTC|Cyanotolyl Tetrazolium Chloride 5-cyano-2,3-bis4-methylphenyl-2H-tetrazolium, monochloride

無水*(100GM     Sodium Phosphate Dibasic Anhydrous ACS Grade Cas 7558-79-4 Formula: Na2HPO4 Formula Weight: 141.96

MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC 1 mg     N-4-methoxy-14-dioxobutyl-L-alanyl-L-alanyl-L-prolyl-N-4-methyl-2-oxo-2H-1-benzopyran-7-yl-L-valinamide I 1270|MeOSuc-AAPV-AMC|Methoxy Succinyl-Ala-Ala-Pro-Val-AMC MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC

DAN-1 EE hydrochloride 50 mg     4-[[3-amino-2-naphthalenylamino]methyl]-benzoic acid ethyl ester monohydrochloride DAN-1 EE hydrochloride

4-1133-Tetramethylbutylphenyl-polyethylene glycol t-Octylphenoxypolyethoxyethanol Polyethylene glycol tert-octylphenyl ether     Triton X-100 MegaPure Detergent 10% Solution
2-APB 1 g     22-diphenyl-132-oxaza-borolidine internal salt 2-APB

Streptavidin:SureLight APC Protein Assay Format 1 mg     Streptavidin:SureLight APC Protein Assay Format

PP2 10 mg     3-4-chlorophenyl-1-11-dimethylethyl-1H-pyrazolo[34-d]pyrimidin-4-amine AGL 1879 PP2

Pyrazolam 1 mg     8-bromo-1-methyl-6-2-pyridinyl-4H-[1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]benzodiazepine

8-iso Prostaglandin E2 isopropyl ester 100 ug     9-oxo-11alpha。,15S-dihydroxy-8beta。)-prosta-5Z13E-dien-1-oic acid isopropyl ester 8-iso PGE2 isopropyl ester 8-iso Prostaglandin E2 isopropyl ester

DiaEasy Dialyzer (3 ml) MWCO 12-14 kDa     DiaEasy Dialyzer (3 ml) MWCO 12-14 kDa
ω-3 Arachidonic Acid-d8 10 mg     8Z11Z14Z17Z-eicosatetraenoic-89111214151718-d8 acid ω-3 AA-d8 ω-3 Arachidonic Acid-d8

4-Chlorometxcathinone xy7nochloride 50 mg     4-CMC|Clephedrone 1-

鬼筆環肽-iFluor 780偶聯物     Phalloidin-iFluor 780 Conjugate

α-Linolenoyl Ethanolamide-d4 100 ug     N-2-xy7noxyetxyl-11’,22-d4-octadeca-9Z12Z15Z-trienamide α-Linolenoyl Ethanolamide-d4

N-Oleoyl Glycine 10 mg     N-9Z-octadecenoyl-glycine N-Oleoyl Glycine

Berbenine     Berbamine dixy7nochloride
LBSagar

沙門氏志賀氏增菌液 Salmonella Shigiella Enrichment 用于志賀氏菌和沙門氏菌增菌培養

豆蛋白質 Soy protein isolate 250 BR90%

厭氧菌瓊脂250g/瓶用于厭氧菌的分離培養incubationmedia厭氧菌瓊脂250g/瓶用于厭氧菌的分離培養

VRB-MUG瓊脂 100g 用于大腸桿菌的固體平板檢測(GB標準)
Mueller-HintonAgar

Candida selective agar acc.to NICKERSON 念珠菌選擇瓊脂 1.10456.0500 MERCK默克 incubation media Candida selective agar acc.to NICKERSON 念珠菌選擇瓊脂 1.10456.0500 MERCK默克

胰蛋白胨大豆肉湯培養基 250g 可廣泛應用于細菌的培養,特別用于消毒劑消毒效果的測試、*的非選擇性增菌培養及蠟...

胎兒骨髓間質干細胞成骨誘導分化
PCR Mix 染料10mL保存CCDABase

ATCC培養基:2693改良Dixon(mDixon) 250g 用于真菌培養

酸性肉湯 Acid Borth 250 用于酸性罐頭食品商業無菌檢驗

Vogel-Johnson瓊脂基礎250g/瓶用于*選擇性分離,每培養基中添加0805incubationmediaVogel-Johnson瓊脂基礎250g/瓶用于*選擇性分離,每培養基中添加0805

三糖鐵管 5ml*20/ 用于腸桿菌科細菌的生化反應篩選

PCR Mix 染料10mL保存變性溫度與時間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達不到變 性溫度就不會產生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復性,因而減少產量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設為 94 20~30 秒,高溫時間應盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95 退火溫度與時間:退火溫度決定 PCR 特異性與產量。溫度高特異性強,但過高則引物 不能與模板牢固結合

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