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探針標記 PCR Mix 0.5mL保存

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更新時間:2017-07-17 13:25:29瀏覽次數:105次

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探針標記 PCR Mix 0.5mL保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。

探針標記 PCR Mix 0.5mL保存產品及特點:
易錯 PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當的選擇方法,則可從構建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規 PCR 的比較如下:本產品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發,本產品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的*性。
2. 配方經過精心優化,突變率穩定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設計位點,則可使產物克隆到表達載體,也可以用于體內蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續易錯 PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產物,對于 1kb 以上的產物,建議分段擴增。
探針標記 PCR Mix 0.5mL保存變性溫度與時間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達不到變 性溫度就不會產生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復性,因而減少產量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設為 94 20~30 秒,高溫時間應盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95 退火溫度與時間:退火溫度決定 PCR 特異性與產量。溫度高特異性強,但過高則引物 不能與模板牢固結合.
探針標記 PCR Mix 0.5mL保存DNA 擴增效率下降;
溫度低產量高,但過低可造成引物與模板 錯配,非特異性產物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設置特定反應的 適退火溫度,可根據引物的(G+C%含量進行推測,一般實驗中退火溫度比擴增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結 合,長時間退火沒有必要。
探針標記 PCR Mix 0.5mL保存詳細說明書:

探針標記 PCR Mix 0.5mL保存使用方法:
1. 30 uL 的標準 PCR 反應體系為例,如果反應體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補水到 30 uL
2.
按已經優化的 PCR 條件進行一定循環數的 PCR(循環數與突變率的關系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯 PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結束后做延伸處理。
17-phenyl trinor Prostaglandin E2 10 mg     9-oxo-11alpha。,15S-dihydroxy-17-phenyl-181920-trinor-prosta-5Z13E-dien-1-oic acid 17-phenyl trinor PGE2 17-phenyl trinor Prostaglandin E2

10058-F4 5 mg     5-[4-ethylphenylmethylene]-2-thioxo-4-thiazolidinone

*七水合物(500GM     Sodium Phosphate Dibasic Heptahydrate ACS Grade Cas 7782-85-6 Formula: Na2HPO4

Arctigenin 100 mg     3R4R-4-[34-dimethoxyphenylmethyl]dihydro-3-[4-hydroxy-3-methoxyphenylmethyl]-23H-furanone Arctigenin

27-Dichlorodihydrofluorescein diacetate 500 mg     2-27-dichloro-36-diacetyloxy-9H-xanthen-9-yl-benzoic acid DCFH|DCFH-DA 27-Dichlorodihydrofluorescein diacetate

4-Nonylphenyl-polyethylene glycol Imbentin-N/52 NP 40     NP-40 Substitute MegaPure Detergent 10% Solution
Fluorometric Developer Reagent 60 ug     Fluorometric Developer Reagent

AZD 2461     4-[[4-fluoro-3-[4-methoxy-1-piperidinylcarbonyl]phenyl]methyl]-12H-Phthalazinone

Daidzin 10 mg     7-(β-D-glucopyranosyloxy-3-4-hydroxyphenyl-4H-1-benzopyran-4-one Daidzoside| NPI 031D Daidzin

25N-NBOMe hydrochloride 5 mg     2C-N-NBOMe 2-2,5-dimethoxy-4-nitnophenyl-N-2-methoxybenzylethanamine, monohydrochloride

AM694 N-5-hydroxypentyl metabolite 10 mg     [1-5-hydroxypentyl-1H-indol-3-yl]2-iodophenyl-methanone AM694 N-5-hydroxypentyl metabolite

DiaEasy Dialyzer (800 ul) MWCO 1 kDa     DiaEasy Dialyzer (800 ul) MWCO 1 kDa
20-HETE-d6 100 ug     20-xy7noxy-5Z8Z11Z14Z-eicosatetraenoic-161617171818-d6 acid 20-xy7noxy Arachidonic Acid-d6 20-HETE-d6

pxenyleetone exempt preparation 1 mg     Benzyl metxyl Ketone|P2P|pxenyl-4-pnopenone 1-pxenyl-4-pnopenone

AMCA      AMCA Alkyne

2-etxylami-pxenylbutane xy7nochloride 5 mg     N,α-dietxyl-benzeneethanamine monoxy7nochloride 2-etxylami-pxenylbutane xy7nochloride

MEDICA 16 1 mg     331414-tetrametxylhexadecanedioic acid MEDICA 16

1346813-Hexaxy7noxy-1011-dimetxylpxenanthro[11098-opqra]perylene-714-dione     Hypericin
BifidobacteriumBSMedium

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