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即用型長片段 PCR 試劑盒20 次保存

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更新時間:2017-07-17 13:29:02瀏覽次數(shù):144次

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即用型長片段 PCR 試劑盒20 次保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。

即用型長片段 PCR 試劑盒20 次保存產(chǎn)品及特點:
易錯 PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當?shù)倪x擇方法,則可從構建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設計位點,則可使產(chǎn)物克隆到表達載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯 PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴增。
即用型長片段 PCR 試劑盒20 次保存變性溫度與時間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達不到變 性溫度就不會產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設為 94 20~30 秒,高溫時間應盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95 退火溫度與時間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強,但過高則引物 不能與模板牢固結合.
即用型長片段 PCR 試劑盒20 次保存DNA 擴增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設置特定反應的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進行推測,一般實驗中退火溫度比擴增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結 合,長時間退火沒有必要。
即用型長片段 PCR 試劑盒20 次保存使用方法:
1. 30 uL 的標準 PCR 反應體系為例,如果反應體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯 PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結束后做延伸處理。
19R-hydroxy Prostaglandin E2 1 mg     9-oxo-11α,15S19R-trihydroxy-prosta-5Z13E-dien-1-oic acid 19R-hydroxy PGE2|19R-OH PGE2 19R-hydroxy Prostaglandin E2

Taurodeoxycholic Acid sodium salt 5 g     STDC 2-[[3α,5β,12α)-3,12-dihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]-ethanesulfonic acid, monosodium salt

無水*(25GM     Sodium Pyruvate Sodium Pyruvate

Oxymatrine 50 mg     4R7aS13aR13bR13cS-dodecahydro-4-oxide-1H5H10H-dipyrido[21-f:3’,2’,1-ij][16]naphthyridin-10-one Matrine 1-oxide Oxymatrine

DAF-2 diacetate 1 mg     2-36-diacetyloxy-45-diamino-9H-xanthen-9-yl-benzoic acid 45-Diaminofluorescein diacetate DAF-2 diacetate

3-Ethyldimethylammoniopropane-1-sulfonate     NDSB-201
COX-FIS Assay Buffer 10X 1 ea     Assay Buffer 10X); COX-FIS Assay Buffer 10X

去乙酰化酶抑制劑 Sirtinol     Sirtinol 5 mg

VU0155069 1 mg     N-[2-[4-5-chloro-23-dihydro-2-oxo-1H-benzimidazol-1-yl-1-piperidinyl]-1-methylethyl]-2-nepxtxelenecarboxamide CAY10593 VU0155069

Cathepsin G Inhibitor I 500 ug     P-

JWH 081 N-5-hydroxypentyl metabolite-d5 100 ug     1-5-hydroxypentyl-1H-indol-3-yl-24567-d5)(4-methoxynaphthalen-1-ylmethanone JWH 081 N-5-hydroxypentyl metabolite-d5

DiaEasy Dialyzer (800 ul) MWCO 6-8 kDa     DiaEasy Dialyzer (800 ul) MWCO 6-8 kDa
Linoleic Acid-d4 5 mg     9Z12Z-octadecadienoic-9101213-d4 acid Linoleic Acid-d4

Medetomidine xy7nochloride 5 mg     Domitor|MPV 785 5-[1-2,3-dimetxylpxenyletxyl]-1H-imidazole, monoxy7nochloride

iFluor 700 酰進     iFluor 700 hydrazide

CMPF-d5 500 ug     2-2-carboxyetxyl-4-metxyl-5-propyl-22’,333-d5furan-3-carboxylic acid CMPF-d5

Docosahexaenoic Acid 100 mg     4Z7Z10Z13Z16Z19Z-docosahexaenoic acid Cervonic Acid|DHA Docosahexaenoic Acid

781313α-Tetradexy7no-3-xy7noxy-2910-trimetxoxyberbinium Neprotin Yatrorizine     Jatrorrhizine
霉菌液體培養(yǎng)基2250g用于霉菌、酵母的增菌和培養(yǎng)

示蛋白胨(Proteose Peptone) Oxoid 500g incubation media 示蛋白胨(Proteose Peptone) Oxoid 500g

玫瑰色鏈霉菌 /

李氏菌增菌肉湯(LB2)9ml*20/包用于李氏菌二步增菌

*檢定培養(yǎng)基 250g *效價測定
三糖鐵瓊脂(TSI)250g用于腸桿菌科細菌的生化反應篩選(葡萄糖,乳糖,蔗糖)

溴百里酚藍乳糖*瓊脂 incubation media 溴百里酚藍乳糖*瓊脂

動力—鹽培養(yǎng)基(A) 250g 用于鑒別細菌動力和鹽還原試驗(GB/T 8538-2008GB/T4789.28-20034.72 GB/T4789.14-20...

鐵瓊脂Ferricnitrateagar用于軍團菌的選擇性分離培養(yǎng)(ISO標準)

糖發(fā)酵基礎肉湯 250g 適用于微生物檢驗中各種糖發(fā)酵實驗,無菌加入各種糖醇類物質(zhì)(
即用型長片段 PCR 試劑盒20 次保存AgarmediumH(MacConkeyagar)

Anaerobic agar acc.to BREWER 厭氧性瓊脂 1.05452.0500 MERCK默克 incubation media Anaerobic agar acc.to BREWER 厭氧性瓊脂 1.05452.0500 MERCK默克

EB增菌液凍干配套試劑 10 每支添加于225ml(026010)中配成EB增菌液。

戊烷脒多粘菌素B瓊脂基礎PentaneAmidinespolymyxinBagarbase

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