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ROX 參考染料 II100μL保存

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更新時間:2017-07-17 13:37:12瀏覽次數(shù):223次

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ROX 參考染料 II100μL保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。

ROX 參考染料 II100μL保存使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯 PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
ROX 參考染料 II100μL保存產(chǎn)品及特點:
易錯 PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯 PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計位點,則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯 PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
ROX 參考染料 II100μL保存DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進(jìn)行推測,一般實驗中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長時間退火沒有必要。
ROX 參考染料 II100μL保存詳細(xì)說明書:

20-hydroxy Prostaglandin E2 50 ug     9-oxo-11α,15S20-trihydroxy-prosta-5Z13E-dien-1-oic acid 20-hydroxy PGE2 20-hydroxy Prostaglandin E2

Delorazepam 10 mg     Chlordesmethyl7iezepem|NSC 169895|Ro 5-3027 7-chloro-5-2-chlorophenyl-1,3-dihydro-2H-1,4-benzodiazepin-2-one

蔗糖(100GM     Sucrose 57-50-1

Spermidine 5 g     N1-3-aminopropyl-14-butanediamine Spermidine

n-Triacontanol 100 mg     1-triacontanol Miraculan|Well-Bloom n-Triacontanol

3-Ethyldimethylammoniopropane-1-sulfonate     NDSB-256
Resorufin Standard Assay Reagent 1 ea     Resorufin Standard Resorufin Standard Assay Reagent

乙酰化組蛋白H3K23多肽     Acetyl Histone H3K23 Peptide 100 ul

Mirin 10 mg     2-amino-5-[4-hydroxyphenylmethylene]-45H-thiazolone Mirin

Glutathione ethyl ester 100 mg     GSH ethyl ester L-γ-glutamyl-L-cysteinyl-glycine 3-ethyl ester

RCS-4 N-5-hydroxypentyl metabolite-d5 100 ug     1-5-hydroxypentyl-1H-indol-3-yl-24567-d5)(4-methoxyphenylmethanone RCS-4 N-5-hydroxypentyl metabolite-d5

DiaEasy Dialyzer (250 ul) MWCO 25 kDa     DiaEasy Dialyzer (250 ul) MWCO 25 kDa
13S-HOTrE(γ) 1 mg     13S-xy7noxy-6Z9Z11E-octadecatrienoic acid 13S-HOTrE(γ)

Picaridin 50 mg     Bayrepel|Icaridin|KBR 3023|Saltidin

mFluor Red 780 琥珀酰亞胺酯     mFluor Red 780 SE

R-1 metxanandamide 50 mg     N-2-xy7noxy-1R-metxyletxyl-5Z8Z11Z14Z-eicosatetraenamide R-+-Arachidonyl-1-xy7noxy-2-Propylamide|AM356 R-1 metxanandamide

45-EpDPE metxyl ester 100 ug     45-epoxy-7Z10Z13Z16Z19Z-docosapentaenoic acid metxyl ester 45-epoxy Docosapentaenoic Acid metxyl ester|45-EDP metxyl ester 45-EpDPE metxyl ester

32-Dixy7no-2-p-xy7noxybenzyl-6-p-xy7noxypxenyl-8-benzylimidazolo[12-a]pyrazin-3-one CLZN     Coelenterezine native
RaKa-Ray培養(yǎng)基250g用于啤酒中乳酸菌檢測和分離培養(yǎng)

雙歧桿菌BS培養(yǎng)基 Bifidobacterium BS Medium 用于雙歧桿菌分離培養(yǎng)

強化梭菌培養(yǎng)基 RCM 250 梭菌的增菌培養(yǎng)和計數(shù)

Tinsdale瓊脂基礎(chǔ)250g/瓶用于白喉桿菌的分離培養(yǎng),每培養(yǎng)基中需添加血清以及250ubationmediaTinsdale瓊脂基礎(chǔ)250g/瓶用于白喉桿菌的分離培養(yǎng),每培養(yǎng)基中需添加血清以及2501

PSAgar
CCDA添加劑2ml*5支每支添加于200mlCCDA基礎(chǔ)中

胰胨瓊脂培養(yǎng)基 250g 用于魚類細(xì)菌病中病原菌的分離培養(yǎng)

麥芽浸膏湯 Malt Extract Broth 200 用于酸性罐頭食品商業(yè)無菌檢驗

兔血漿纖維蛋白原(RPF)瓊脂培養(yǎng)基250g/瓶用于凝固酶陽性葡萄球菌檢測,需添加2080520806、牛纖維蛋白原、*抑制劑incubationmedia兔血漿纖維蛋白原(RPF)瓊脂培養(yǎng)基250g/瓶用于凝固酶陽性葡萄球菌檢測,需添加2080520806、牛纖維蛋白原、*抑制劑

TSI
ROX 參考染料 II100μL保存DextroseSemisolidMedium

AHM鑒別培養(yǎng)基 250g 用于致病性嗜水氣單胞菌的鑒別

馬鈴薯葡萄糖瓊脂 (PDA) Potato Dextrose Agar 250 用于霉菌、酵母菌計數(shù)(GB標(biāo)準(zhǔn))

TBX顯色培養(yǎng)基l/瓶用于大腸桿菌快速檢測,24h內(nèi)出結(jié)果,大腸桿菌顯藍(lán)色incubationmediaTBX顯色培養(yǎng)基l/瓶用于大腸桿菌快速檢測,24h內(nèi)出結(jié)果,大腸桿菌顯藍(lán)色

100mlBolton肉湯均質(zhì)袋 10/ 用于空腸彎曲菌的增菌培養(yǎng)

ROX 參考染料 II100μL保存變性溫度與時間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95 退火溫度與時間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強,但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合

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