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cDNA 第二鏈合成試劑盒30 次圖片

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更新時間:2017-07-17 13:42:52瀏覽次數:163次

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cDNA 第二鏈合成試劑盒30 次圖片是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。

cDNA 第二鏈合成試劑盒30 次圖片使用方法:
1. 30 uL 的標準 PCR 反應體系為例,如果反應體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補水到 30 uL
2.
按已經優化的 PCR 條件進行一定循環數的 PCR(循環數與突變率的關系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯 PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結束后做延伸處理。
cDNA 第二鏈合成試劑盒30 次圖片產品及特點:
易錯 PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當的選擇方法,則可從構建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規 PCR 的比較如下:本產品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發,本產品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的*性。
2. 配方經過精心優化,突變率穩定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設計位點,則可使產物克隆到表達載體,也可以用于體內蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續易錯 PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產物,對于 1kb 以上的產物,建議分段擴增。
cDNA 第二鏈合成試劑盒30 次圖片DNA 擴增效率下降;
溫度低產量高,但過低可造成引物與模板 錯配,非特異性產物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設置特定反應的 適退火溫度,可根據引物的(G+C%含量進行推測,一般實驗中退火溫度比擴增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結 合,長時間退火沒有必要。
cDNA 第二鏈合成試劑盒30 次圖片詳細說明書:

Prostaglandin E3 1 mg     9-oxo-11alpha。,15S-dihydroxy-prosta-5Z,13E17Z-trien-1-oic acid; PGE3; Prostaglandin E3

MK2 Inhibitor III 500 ug     1,5,6,7-tetrahydro-2-[2-3-inoneolinyl-4-pyridinyl]-4H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-4-one, monohydrate

蔗糖(5KG     Sucrose 57-50-1

Calpain Inhibitor I 10 mg     N-acetyl-L-leucyl-N-[1S-1-formylpentyl]-L-leucinamide; Ac-Leu-Leu-Nle-Aldehyde|ALLN|MG 101 Calpain Inhibitor I

Pimonidazole 5 mg     α-[2-nitH-imidazol-1-ylmethyl]-1-pipeni7ineethanol; NSC 380540|Ro 03-8799; Pimonidazole

Universal Protease and Phosphatase Inhibitor Cocktail, EZBlock     EZBlock Universal Protease and Phosphatase Inhibitor Cocktail
LSD1 Assay Peptide 1 ea     LSD1 Peptide|Lysine-Specific Demethylase 1 Assay Peptide LSD1 Assay Peptide

*基化組蛋白H4K20多肽     Trimethyl Histone H4K20 Peptide 200 ul

N-octadecanoyl-L-Homoserine lactone 5 mg     N-[3S-tetrahydro-2-oxo-3-furanyl]-octadec*; C18-HSL; N-octadecanoyl-L-Homoserine lactone

Ac-DEVD-AMC 10 mg     Caspase-3 Substrate Fluorogenic|N-Acetyl-Asp-Glu-Val-Asp-7-amido-4-Methylcoumarin N-acetyl-L-α-aspartyl-L-α-glutamyl-L-valyl-N-4-methyl-2-oxo-2H-1-benzopyran-7-yl-L-α-asparagine

MAM2201 N-pentanoic acid metabolite-d5 100 ug     5-3-4-methyl-1-naphthoyl-1H-indol-1-yl-2,4,5,67-d5pentanoic acid; JWH 122 N-pentanoic acid metabolite-d5; MAM2201 N-pentanoic acid metabolite-d5

Ionomycin (Calcium salt)     Ionomycin (Calcium salt)
UltraPure Water 4 L     UltraPure Water

3-[2-N-Biotinylaminoetxyldithio]propanoic Acid 25 mg     3-[[2-[[5-[3aS,4S,6aR-hexaxy7no-2-oxo-1H-thieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-1-oxopentyl]amino]etxyl]dithio]-propanoic acid

FMOC-LysCy3-OH     FMOC-LysCy3-OH

Amiodarone xy7nochloride 1 g     2-butyl-3-benzofuranyl[4-[2-dietxylaminoethoxy]-35-diiodopxenyl]-metxanone, monoxy7nochloride; Cordarex|Pacerone Amiodarone xy7nochloride

Stearidonic Acid 5 mg     6Z9Z,12Z,15Z-octadecatetraenoic acid Moroctic Acid Stearidonic Acid

2-xy7noxy-4-[[[[4-metxylpxenylsulfonyl]oxy]acetyl]amino]-benzoic acid NSC 74859 S3I-201     EZSolution Stat3 Inhibitor I, S3I-201
D/ENeutralizingBroth

水稻水培養液 250g 用于水稻的水培養液

改良綠色酵母菌和真菌肉湯 m-GREEN YEAST and FUNGI BROTH 250 用于飲料中真菌及酵母菌檢測(Acumedia方法)

標準Ⅰ號營養瓊肉湯250g/瓶用于細菌培養,營養豐富incubationmedia標準Ⅰ號營養瓊肉湯250g/瓶用于細菌培養,營養豐富

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LysozymeBrothBase

葡萄糖瓊脂 Dextrose Agar 用于細菌的綜合生化試驗

XLD 瓊脂 Xylose Lysine Desoxycholate Agar 250 選擇性培養基,用于志賀氏菌的選擇性培養(FDA標準)

脫脂奶蔗糖蛋白胨培養基250g/瓶用于致病性嗜水氣單胞菌的鑒別incubationmedia脫脂奶蔗糖蛋白胨培養基250g/瓶用于致病性嗜水氣單胞菌的鑒別

ModifiedSorbitolMaconkeyAgar
cDNA 第二鏈合成試劑盒30 次圖片蠟樣芽孢桿菌顯色培養基CRM005l用于食品樣本中蠟樣芽孢桿菌的快速分離和鑒定。

Agar 瓊脂粉 Japan 1kg incubation media Agar 瓊脂粉 Japan 1kg

裂皮側耳 產丁酸 /

TTBBroth

TryptoseSoyaAgar

cDNA 第二鏈合成試劑盒30 次圖片變性溫度與時間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達不到變 性溫度就不會產生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復性,因而減少產量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設為 94 20~30 秒,高溫時間應盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95。 退火溫度與時間:退火溫度決定 PCR 特異性與產量。溫度高特異性強,但過高則引物 不能與模板牢固結合

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