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一步式 RT-PCR Mix 1mL保存

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更新時間:2017-07-17 13:50:43瀏覽次數:99次

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一步式 RT-PCR Mix 1mL保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。

一步式 RT-PCR Mix 1mL保存產品及特點:
易錯 PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當的選擇方法,則可從構建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規 PCR 的比較如下:本產品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發,本產品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的*性。
2. 配方經過精心優化,突變率穩定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設計位點,則可使產物克隆到表達載體,也可以用于體內蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續易錯 PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產物,對于 1kb 以上的產物,建議分段擴增。
一步式 RT-PCR Mix 1mL保存變性溫度與時間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達不到變 性溫度就不會產生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復性,因而減少產量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設為 94 20~30 秒,高溫時間應盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95 退火溫度與時間:退火溫度決定 PCR 特異性與產量。溫度高特異性強,但過高則引物 不能與模板牢固結合.
一步式 RT-PCR Mix 1mL保存DNA 擴增效率下降;
溫度低產量高,但過低可造成引物與模板 錯配,非特異性產物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設置特定反應的 適退火溫度,可根據引物的(G+C%含量進行推測,一般實驗中退火溫度比擴增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結 合,長時間退火沒有必要。
一步式 RT-PCR Mix 1mL保存詳細說明書:

一步式 RT-PCR Mix 1mL保存使用方法:
1. 30 uL 的標準 PCR 反應體系為例,如果反應體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補水到 30 uL
2.
按已經優化的 PCR 條件進行一定循環數的 PCR(循環數與突變率的關系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯 PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結束后做延伸處理。
Prostaglandin F1α Alcohol 1 mg     19alpha。,11alpha。,15S-tetrahydroxy-prost-13E-ene PGF1α Alcohol Prostaglandin F1α Alcohol

OTX015 1 mg     HY-15743 6S-4-4-chlorophenyl-N-4-hydroxyphenyl-2,3,9-trimethyl-6H-thieno[3,2-f][1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]diazepine-6-acetamide

三羥基氨甲烷鹽酸鹽(100GM     TRIS Hydrochloride 1185-53-1 MW 157.6

CUR 61414 5 mg     N-[3S5S-1-13-benzodioxol-5-ylmethyl-5-1-piperazinylcarbonyl-3-pyrrolidinyl]-N-[3-methoxyphenylmethyl]-33-dimethyl-but* G-856 CUR 61414

8-hydroxy-2-deoxy Guanosine 1 mg     2-deoxy-8-hydroxy-guanosine 8-OH-dG 8-hydroxy-2-deoxy Guanosine

Hedgehog Hh Signaling Pathway Inhibitors Set     DiscoveryPak Hedgehog Hh Signaling Pathway Inhibitors Set
Methyltransferase Resorufin Buffer 10X 1 ea     MT Resorufin Buffer 10X); Methyltransferase Resorufin Buffer 10X

組蛋白H3多肽(安基酸:15-39     Histone H3 Peptide residues 15-39 200 ul

--CP 47497 solution 10 mg     2[1S3R-3-hydroxycyclohexyl]-5-2-methyloctan-2-ylphenol --CP 47497 solution

Ac-VEID-AMC 5 mg     Caspase-6 Substrate Fluorogenic|N-Acetyl-Val-Glu-Ile-Asp-7-amido-4-Methylcoumarin N-acetyl-L-valyl-L-α-glutamyl-L-isoleucyl-N-4-methyl-2-oxo-2H-1-benzopyran-7-yl-L-α-asparagine

JWH 203 N-pentanoic acid metabolite-d5 500 ug     5-3-2-2-chlorophenylacetyl-1H-indol-1-ylpentanoic acid-24567-d5 JWH 203 N-pentanoic acid metabolite-d5

Fluprostenol serinol amide (50 mg)     Flu-SA, Fluprostenol serinol amide, N-[(2-hydroxy-1-hydroxymethyl)ethyl]-9α,11α,15R-trihydroxy-16-(3-trifluoromethyl)phenoxy)-17,18,19,2-tetranor-prosta-5Z,13E-dien-1-amide
Precoated Mouse Anti-Rabbit IgG EIA 96-Well Strip Plate 5 ea     Precoated Mouse Anti-Rabbit IgG EIA 96-Well Strip Plate

Danazol 500 mg     Danocrine|Ladogal|NSC 270916|WIN 17,757 pregna-2,4-dien-20-yno[2,3-d]isoxazol-17α-ol

SRB-VAD-FMK [Sulforhodamine B-VAD-FMK]     SRB-VAD-FMK [Sulforhodamine B-VAD-FMK]

Cell-Based Assay Neutrophil Isolation Histopaque 25 ml     Cell-Based Assay Neutrophil Isolation Histopaque

Decanoyl m-nitnoaniline 25 mg     N-3-nitnopxenyl-dec* DemNA Decanoyl m-nitnoaniline

2-4-tert-Butylpxenyl-1H-benzimidazole 2-[4-11-Dimetxyletxylpxenyl]-1H-benzimidazole     ZLN005
鹽蛋白胨水培養基250g用于化妝品中銅綠假單胞菌的檢測

酸性L-J培養基基礎 250(g) incubation media 酸性L-J培養基基礎 250(g)

氯化鎂孔雀綠肉湯 MMRV Medium 250 沙門氏菌的選擇性增菌培養

煌綠黃胺嘧啶瓊脂250用于沙門氏菌的分離培養(Acumedia方法)incubationmedia煌綠黃胺嘧啶瓊脂250用于沙門氏菌的分離培養(Acumedia方法)

沙門氏菌A-F群診斷血清 1ml 用于沙門氏菌的血清學試驗
BF839菌計數選擇培養基250g用于脆弱擬桿菌BF839固體平板計數

50061 BR 5kg incubation media 50061 BR 5kg

副溶血性弧菌 produces restriction endonuclease SnaBI 生產限制性核酸內切酶SnaBI /

無菌病毒運輸液(VTM)3ml/*36用于甲流病毒標本運送

30%葡萄糖溶液(PH6.5±0.5) 250g 用于嗜滲酵母檢驗時的樣品稀釋(GB標準)
一步式 RT-PCR Mix 1mL保存胰蛋白胨大豆瓊脂培養基28072250g用于普通的或營養要求較高的細菌的培養,還用于醫藥工業潔凈室無菌程度的監測及消毒劑消毒效果的...

Agar A 瓊脂A 100g incubation media Agar A 瓊脂A 100g

香菇 /

緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR-VP試驗用培養基)250g用于大腸桿菌的甲基紅實驗和VP實驗

碘伏(液體) 500g 炭疽桿菌檢測用配套試劑

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