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環狀 DNA 全基因組擴增試劑盒30 次保存

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更新時間:2017-07-17 13:55:26瀏覽次數:114次

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環狀 DNA 全基因組擴增試劑盒30 次保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。

環狀 DNA 全基因組擴增試劑盒30 次保存產品及特點:
易錯 PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當的選擇方法,則可從構建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規 PCR 的比較如下:本產品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發,本產品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的*性。
2. 配方經過精心優化,突變率穩定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設計位點,則可使產物克隆到表達載體,也可以用于體內蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續易錯 PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產物,對于 1kb 以上的產物,建議分段擴增。
環狀 DNA 全基因組擴增試劑盒30 次保存變性溫度與時間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達不到變 性溫度就不會產生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復性,因而減少產量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設為 94 20~30 秒,高溫時間應盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95。 退火溫度與時間:退火溫度決定 PCR 特異性與產量。溫度高特異性強,但過高則引物 不能與模板牢固結合.
環狀 DNA 全基因組擴增試劑盒30 次保存DNA 擴增效率下降;
溫度低產量高,但過低可造成引物與模板 錯配,非特異性產物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設置特定反應的 適退火溫度,可根據引物的(G+C%含量進行推測,一般實驗中退火溫度比擴增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結 合,長時間退火沒有必要。
環狀 DNA 全基因組擴增試劑盒30 次保存詳細說明書:

環狀 DNA 全基因組擴增試劑盒30 次保存使用方法:
1. 30 uL 的標準 PCR 反應體系為例,如果反應體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補水到 30 uL
2.
按已經優化的 PCR 條件進行一定循環數的 PCR(循環數與突變率的關系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯 PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結束后做延伸處理。
3-methoxy Prostaglandin F1α 1 mg     3-methoxy-9alpha。,11。alpha。,15S-trihydroxy-prost-13Z-en-1-oic acid 3-methoxy PGF1α; 3-methoxy Prostaglandin F1α

Clonidine hydrochloride 500 mg     Catapres|Kapvay|ST 155 N-2,6-dichlorophenyl-4,5-dihydro-1H-imidazol-2-amine, monohydrochloride

胰蛋白胨(500GM     Tryptone, Tryptic digest of casein.

Rabeprazole sodium salt 10 mg     2-[[[4-3-methoxypropoxy-3-methyl-2-pyridinyl]methyl]sulfinyl]-1H-benzimidazole, monosodium salt; Aciphex

Hydroxy Linoleins 500 ug     Hydroxy Linoleins

YPAC Cocktail Set 1000X     StemBoost YPAC Cocktail Set 1000X), Sterile-Filtered
MPO Hydrogen Peroxide 1 ea     MPO Hydrogen Peroxide

*標記單甲基化組蛋白H3K79多肽     Biotinylated Monomethyl Histone H3K79 Peptide 200 ul

3-dodecanoyl-NBD Cholesterol 500 ug     12-[7-nitno-213-benzoxadiazol-4-ylamino]-3S10R,13R-3-methoxy-10,13-dimethyl-17-((R-6-methylheptan-2-yl-tetradecahydro-1H-cyclopenta[α]e 3-C12-NBD Cholesterol 3-dodecanoyl-NBD Cholesterol

Wiskostatin 1 mg     3,6-dibromo-α-[dimethylaminomethyl]-9H-carbazole-9-ethanol

AM694 N-pentanoic acid metabolite-d5 500 ug     5-3-2-iodobenzoyl-1H-indol-1-yl-2,4,56,7-d5pentanoic acid; AM694 N-pentanoic acid metabolite-d5

N,N -Dicyclohexylurea (100 g)     DCU|NSC 1713, N,N -Dicyclohexylurea, N,N’-dicyclohexyl-urea
Precoated Goat Anti-Mouse IgG EIA 96-Well Strip Plate 5 ea     Precoated Goat Anti-Mouse IgG EIA 96-Well Strip Plate

Trimetxoprim 50 g     Trimpex 5-[3,4,5-trimetxoxypxenylmetxyl]-2,4-pyrimidinediamine

FluoroQuest封篇及,含DAPI     FluoroQuest Mounting Medium with DAPI

Donepezil 10 mg     2,3-dixy7no-56-dimetxoxy-2[[1-pxenylmetxyl-4-piperidinyl]metxyl]-1H-inden-1-one; Aricept Donepezil

R-Palmitoyl-1-metxyl Ethanolamide 5 mg     N-2-xy7noxy-1R-metxyletxyl-hexadec*; R-1 PMA R-Palmitoyl-1-metxyl Ethanolamide

N-[1-metxyl-4-piperidinylmetxyl]-3-[3-trifluorometxoxypxenyl]imidazo[1,2-b]pyridazin-6-amine     SGI-1776
肉湯培養基250g用于初次分離細菌的增菌培養

糖發酵基礎肉湯 Bromcresol Purple Broth Base 適用于微生物檢驗中各種糖發酵實驗,無菌加入各種糖醇類物質(SN標準)

SCHAEDLER厭氧菌瓊脂 SCHAEDLER Agar 250 厭氧菌的分離培養

亞碲酸鉀血瓊脂基礎250g/瓶用于白喉桿菌的分離培養,需添加亞碲酸鉀及羊血incubationmedia亞碲酸鉀血瓊脂基礎250g/瓶用于白喉桿菌的分離培養,需添加亞碲酸鉀及羊血

EnterococcusBroth
AgarmediumH(MacConkeyagar)

Anaerobic agar acc.to BREWER 厭氧性瓊脂 1.05452.0500 MERCK默克 incubation media Anaerobic agar acc.to BREWER 厭氧性瓊脂 1.05452.0500 MERCK默克

EB增菌液凍干配套試劑 10 每支添加于225ml(026010)中配成EB增菌液。

戊烷脒多粘菌素B瓊脂基礎PentaneAmidinespolymyxinBagarbase

APTBroth
環狀 DNA 全基因組擴增試劑盒30 次保存瓊脂培養基H250g用于腸道致病菌的選擇性分離培養。

A-1 Broth A-1肉湯 1.00415.0500 MERCK默克 incubation media A-1 Broth A-1肉湯 1.00415.0500 MERCK默克

李氏增菌液LB1凍干配套試劑 10 每支添加于225ml(026040)中配成LB1增菌液。

十二烷基鈉瓊脂Sodiumlaurylsulfateagar用于鼠疫桿菌抗噬菌體培養

APT肉湯 250g 用于異質發酵乳酸桿菌和其它需高含量鹽酸胺素菌的培養。

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