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CTP 溶液,2.5mM2mL保存

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更新時間:2017-07-17 14:12:42瀏覽次數(shù):152次

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CTP 溶液,2.5mM2mL保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。

CTP 溶液,2.5mM2mL保存產(chǎn)品及特點:
易錯 PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計位點,則可使產(chǎn)物克隆到表達載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯 PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴增。
CTP 溶液,2.5mM2mL保存變性溫度與時間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達不到變 性溫度就不會產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95 退火溫度與時間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強,但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合.
CTP 溶液,2.5mM2mL保存DNA 擴增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進行推測,一般實驗中退火溫度比擴增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長時間退火沒有必要。
CTP 溶液,2.5mM2mL保存詳細說明書:

CTP 溶液,2.5mM2mL保存使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯 PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
Prostaglandin F1β 10 mg     9beta。,11alpha。,15S-trihydroxy-prost-13E-en-1-oic acid 9β-PGF1α|PGF1β; Prostaglandin F1β

3-CAF 5 mg     naphthalen-2-yl 1-2-fluorophenyl-1H-indazole-3-carboxylate

杜氏磷酸緩沖液(10X1LT     Dulbeccos PBS Without calcium and magnesium.

Imiquimod 1 g     1-2-methylpropyl-1H-imidazo[45-c]quinolin-4-amine Aldara|Beselna|R-837|TMX 101|Zyclara Imiquimod

Trichostatin A 5 mg     7-[4-dimethylaminophenyl]-N-hydroxy-46R-dimethyl-7-oxo-2E4E-heptadienamide TSA Trichostatin A

9-Bromo-712-dihydropyrido[3’,2:23]azepino[45-b]indol-65H-one     1-Azakenpaullone
PA Assay Buffer 10X 1 ea     PA Assay Buffer 10X

去乙酰化酶抑制劑 APHA Compound 8     APHA Compound 8 1 mg

thio-p-Toluamide 5 g     4-methyl-benzenecarbothioamide 4-thioamide thio-p-Toluamide

1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-O-ethyl-3-PC chloride 250 mg     1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-O-ethyl-3-Phosphocholine|1,2-EDPPC|DPePC 4-ethoxy-N,N,N-trimethyl-10-oxo-7R-[1-oxohexadecyloxy]-4-oxide-3,5,9-trioxa-4-phosphapentacosan-1-aminium, monochloride

PB-22 N-5-hydroxypentyl metabolite 10 mg     quinolin-8-yl 1-5-hydroxypentyl-1H-indole-3-carboxylate PB-22 N-5-hydroxypentyl metabolite

5,6,7,8-tetrahydro-2-Naphthoic Acid (50 mg)     NSC 131342, 5,6,7,8-tetrahydro-2-Naphthoic Acid, 5,6,7,8-tetrahydro-2-nepxtxelenecarboxylic acid
potewwium xy7noxide 1 ea     potewwium xy7noxide

Zilpaterol     RU-42173|Zilmax 6R,7R-rel-4,5,6,7-tetraxy7no-7-xy7noxy-6-[1-metxyletxylamino]-imidazo[4,5,1-jk][1]benzazepin-21H-one

綠色活細胞熒光探針Cytol Green     Cytol Green

Rosiglitazone meleete 500 mg     Avandia|BRL 49653C 5-[[4-[2-metxyl-2-pyridinylaminoethoxy]pxenyl]metxyl]-2,4-thiazolidinedione, 2Z-2-butenedioate 1:1

2-Fluoropalmitic Acid 25 mg     2-fluorohexadecanoic acid 2-Fluoropalmitic Acid

((1S2S4R-4-4-(((S-23-dixy7H-inden-1-ylamino-7H-pyrrolo[23-d]pyrimidin-7-yl-2-xy7noxycyclopentylmetxyl sulfamate     MLN-4924
EG培養(yǎng)基250g用于厭氧菌計數(shù)

衛(wèi)矛醇半固體瓊脂 Dulcitol Semisolid Agar 生化培養(yǎng)基,用于細菌衛(wèi)予醇發(fā)酵試驗(SN標(biāo)準(zhǔn))

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