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單細胞裂解液 (DNA)1mL保存

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更新時間:2017-07-17 14:14:33瀏覽次數(shù):223次

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單細胞裂解液 (DNA)1mL保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。

單細胞裂解液 (DNA)1mL保存使用方法:
1. 30 uL 的標準 PCR 反應體系為例,如果反應體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補水到 30 uL
2.
按已經優(yōu)化的 PCR 條件進行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯 PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結束后做延伸處理。
單細胞裂解液 (DNA)1mL保存產品及特點:
易錯 PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當?shù)倪x擇方法,則可從構建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發(fā),本產品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的*性。
2. 配方經過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設計位點,則可使產物克隆到表達載體,也可以用于體內蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯 PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產物,對于 1kb 以上的產物,建議分段擴增。
單細胞裂解液 (DNA)1mL保存DNA 擴增效率下降;
溫度低產量高,但過低可造成引物與模板 錯配,非特異性產物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設置特定反應的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進行推測,一般實驗中退火溫度比擴增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結 合,長時間退火沒有必要。
單細胞裂解液 (DNA)1mL保存詳細說明書:

11β-Prostaglandin F1β 10 mg     9。beta。,11beta。,15S-trihydroxy-prost-13E-en-1-oic acid; 9β,11β-PGF1α|11β-PGF1β|11-epi PGF1β; 11β-Prostaglandin F1β

TZ9 5 mg     4-amino-6-phenylamino-2-4-nitnobenzoate-1,3,5-tri-2-methanol

1000X Gamborgs維生素混合物溶液(100ML     Gamborgs Vitamin Mixture, 1000X Solution

Adenosine 5-(γ-thio-triphosphate litxium salt 1 mg     P-anhydride with phosphorothioic acid adenosine 5-trihydrogen diphosphate), tetralitxium salt; ATPγS Adenosine 5-(γ-thio-triphosphate litxium salt

CAY10398 5 mg     4-dimethylamino-N-[6-hydroxyamino-6-oxohexyl]-benzamide; MD 85|PX 089274; CAY10398

S-4-ethyl-4-hydroxy-1H-pyrano[3’,4:6,7]indolizi,2-b]quinoline-3,14-4H,12H-dione     Camptothecin 2 mM
PA Assay ADHP 1 ea     PA Assay ADHP

丁酸鈉     Sodium Butyrate 1 g

4-Methylbenzamide oxime 1 g     N-hydroxy-4-methyl-benzenecarboximidamide p-Toylamideoxime; 4-Methylbenzamide oxime

CAY10678 1 mg     N-

PB-22 N-pentanoic acid metabolite 5 mg     5-3-((quinolin-8-yloxycarbonyl-1H-indol-1-ylpentanoic acid; PB-22 N-pentanoic acid metabolite

Microcystin-LR (500 ug)     Cyanoginosin-LR, Microcystin-LR, Toxin T 17 (Microcystis aeruginosa)
Phosphate Buffer 100 dtn     Phosphate Buffer

1-thio-β-D-Glucose wo7ium salt 250 mg     Click Tag

5-FAM疊氮化物     5-FAM Azide

UNC0631 25 mg     N-[1-cyclohexylmetxyl-4-piperidinyl]-2-[hexaxy7no-4-1-metxyletxyl-1H-1,4-diazepin-1-yl]-6-metxoxy-7-[3-1-piperidinylpropoxy] 4-inoneazolinamine

Docosatetraenoyl Ethanolamide 25 mg     N-2-xy7noxyetxyl-7Z10Z13Z,16Z-docosatetraenamide DEA Docosatetraenoyl Ethanolamide

4-4-Benzofurazanyl-1,4-dixy7no-2,6-dimetxyl-3,5-pyridinedicarboxylic acid, metxyl, 1-metxylester diester     Neurodezine
牛津瓊脂(OXA)基礎250g用于單增李氏菌的選擇性分離(SN標準)

無機鹽瓊脂培養(yǎng)基 Inorganic Agar 用于紡織品防霉性能測試

固體改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基 Martin Solid,Modified 250 生物制品無菌試驗的霉菌檢查

22ubos肉湯基礎添加劑5ml×盒每2支用于90mlincubationmedia22ubos肉湯基礎添加劑5ml×盒每2支用于90ml

CCFA瓊脂基礎 250g 用于艱難梭菌選擇性分離培養(yǎng)
*卵黃多粘菌素瓊脂平板(MYP)2838mX20個用于蠟樣芽孢桿菌的菌數(shù)測定及分離培養(yǎng)(GB/T4789.28-20034.64,GB/T4789.03,SN02...

*葡萄糖酵母提取物選擇性培養(yǎng)基(OGYE培養(yǎng)基) (CM0545) Oxoid incubation media *葡萄糖酵母提取物選擇性培養(yǎng)基(OGYE培養(yǎng)基) (CM0545) Oxoid

炭黑曲霉 分離源:發(fā)酵劑 /

心浸液瓊脂250g用于培養(yǎng)營養(yǎng)要求高的微生物

克氏雙糖鐵瓊脂 250g 用于細菌復合生化試驗(
單細胞裂解液 (DNA)1mL保存脫脂奶蔗糖胰蛋白胨瓊脂250g用于致病性嗜水氣單胞菌的鑒別培養(yǎng)

50327 麥芽提取粉 BR 400g 培養(yǎng)基原材料,特制適用于培養(yǎng)酵母菌 incubation media 50327 麥芽提取粉 BR 400g 培養(yǎng)基原材料,特制適用于培養(yǎng)酵母菌

海濱芽孢桿菌 產*酸 /

TerrificBroth

野生酵母培養(yǎng)基 250g 用于野生酵母計數(shù)培養(yǎng)

單細胞裂解液 (DNA)1mL保存變性溫度與時間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達不到變 性溫度就不會產生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復性,因而減少產量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設為 94 20~30 秒,高溫時間應盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95。 退火溫度與時間:退火溫度決定 PCR 特異性與產量。溫度高特異性強,但過高則引物 不能與模板牢固結合

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