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產品名稱 | 腹膜毛細血管內皮細胞 |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 |
分類 | 原代細胞 |
貨號 | GOY-01X0986 |
商品介紹:
名稱 腹膜毛細血管內皮細胞 2.組織來源:腹膜組織 3.產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介: 人腹膜毛細血管內皮細胞分離自腹膜組織;腹膜是存在于高等脊椎動物腹腔中的一層黏膜,主要由間皮細胞和間質(結締組織、纖維、毛細血管、淋巴管)構成,藉由結締組織的支持所形成的一層膜狀組織。腹膜包覆大部分腹腔內的器官,能分泌黏液潤濕臟器的表面,減輕臟器間的摩擦。腹腔臟器的血液、淋巴和神經組織經由腹膜與外界相連;腹膜也具有吸收撞擊保護內臟的效果。腹膜(peritoneum)為全身面積最大、配布最復雜的漿膜,由皮及少量結締組織構成,薄而光滑,呈半透明狀。襯于腹、盆腔壁內表面的腹膜稱為壁腹膜(parietal-peritoneum)或腹壁薄層;覆蓋腹、盆腔器表面的部分稱為臟腹膜(visceral-peritoneum)腹膜或腹膜臟層。臟腹膜與壁腹膜互相延續、移行,共同圍成不規則的潛在性腔隙,稱為腹膜腔(peritoneal-cavity)。腹膜腔是臟、壁兩層腹膜之間相互移行圍成的潛在性間隙。腹膜腔內有少量漿液,在臟器活動時可減少摩擦。腹膜的主要生理功能:①分泌功能;②吸收功能;③再生能力;④防御功能;⑤調理功能。臟、壁腹膜都有豐富的毛細血管,毛細血管上有不同的孔徑;腹膜的毛細血管和毛細血管后靜脈是進行溶質交換的主要場所。 5.方法簡介: ()實驗室分離的人腹膜毛細血管內皮細胞采用膠原酶-中性聯合消化法結合化學試劑抑制法、并通過內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測: ()實驗室分離的人腹膜毛細血管內皮細胞經CD31免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息: 包被條件PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%) 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-H088 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態內皮細胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25% 培養條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
使用方法:
收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細胞培養箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩定細胞狀態。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養瓶中的培養基,用PBS清洗細胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代,然后補充新鮮的*培養基至5mL,放入37℃,5% CO2細胞培養箱中培養;
4) 待細胞*貼壁后,培養觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養基。
培養操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
40uL×4 雙脫氧dNTP溶液(10mM) ddNTP Solution -20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Perilipin-2
2 ug pLLP-STII pLLP-STII 低溫運輸,-20℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Septin-5
羽絨羽毛微生物檢驗 0.156-10 ng/ml 豬托克特諾病毒(TTV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
1瓶 MV3細胞株 MV3 低溫運輸和保存 1.5
腹膜毛細血管內皮細胞DMBT1 抑基因抗體 規格: 0.1mlFLASH/P8AP2 半蛋白8相關蛋白2抗體 規格: 0.1ml
RDH11 脫11抗體(丙型毒核心蛋白) 規格: 0.2ml
Lin-28B RNA結合蛋白LIN28B抗體 規格: 0.2ml
KMT1C/G9a 組蛋白H3賴氨酸9甲基化1C抗體 規格: 0.2ml
2 ug pUC 20 pUC 20 低溫運輸,-20℃保存
100次 H5N1神經抑制劑鑒定試劑盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
CDK2AP2 細胞周期素依賴激2相關蛋白2抗體 規格: 0.2mlDNAH9 軸絲動力蛋白重鏈9抗體 規格: 0.2ml
cGMP 環磷酸鳥苷抗體 規格: 0.2mlLipophilin B 親脂性蛋白B抗體 規格: 0.2ml
ACL6B/BAF53b 肌動蛋白樣蛋白6B抗體 規格: 0.2ml
Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr1021) 磷酸化小板源性生因子受體-B抗體 規格: 0.1ml
Phospho-Histone H3(Ser28) 磷酸化組蛋白H3抗體 規格: 0.1ml
氯化鈉素B肉湯基礎(SCPB) Sodium Chloride Polymyxin Broth Base 250g