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產品名稱:GCDH葡萄糖脫氫酶檢測試劑盒微量法
規格:100管/96樣
檢測方法:微量法
貨號:FS-01S63645
商品介紹:
測定意義 GCDH(EC 1.1.1.47)催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H,大量存在于高等動物的肝臟和弱氧化醋桿菌中。在低聚果糖中使用GCDH,不僅能去除低聚果糖中的葡萄糖提高低聚果糖的含量,而且生成的葡萄糖酸與鈣離子結合生成的葡萄糖酸是一種理 想的補鈣制劑。因而,GCDH已成為制備高含量低聚果糖的理想用酶。 測定原理: GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH,在340nm下測定NADH上升速率,即可反映GCDH活性。 需自備的儀器和用品: 紫外分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
操作步驟:
實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。 1. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。 2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。 3. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。 4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。 5. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。 6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。 8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。 |
粗酶液提取:
1、細胞或組織樣品的制備: 培養細胞:先收集細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細胞數量(104個):提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1ml提取液),超聲波破碎細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。組織:按照組織質量(g):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。 2、血清(漿)樣品:直接檢測。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
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GCDH葡萄糖脫氫酶檢測試劑盒微量法異丁基鋰 1.6M 正己烷溶液2-基-3-甲基吡 95%Anti-Annexin I/FITC 熒光標記人、大、小鼠膜粘連蛋白 I抗體IgG
(基硅烷)甲基化鋰 0.56 M in hexanes核黃-5′-磷鈉鹽水合物 73-79%(HPLC)Anti-Annexin II/FITC 熒光標記膜粘連蛋白-2抗體IgG
基鋁 2.0 M 甲溶液核黃磷鈉 93%Anti-Annexin III /FITC 熒光標記膜粘連蛋白 Ⅲ抗體IgG
3-溴甲 98%核黃磷鈉 USP級Anti-Annexin IV /FITC 熒光標記膜粘連蛋白 Ⅳ抗體IgG
2,5-二溴甲 96%鹽去氧腎上腺 98%Anti-Annexin V/FITC 熒光標記重組膜粘連蛋白-5(人)抗體IgG
對氟甲 98%醋氯己定 98%Anti-Annexin VI/FITC 熒光標記膜粘連蛋白 VI抗體IgG
對氟甲 99%,升華純化鹽洗必泰 96%Anti-Anopheles stephensi protein 1/FITC 熒光標記按蚊抗體IgG
3-氟甲 98%薯蕷皂 分析標準品,>95%Anti-ANP/FITC 熒光標記抗心鈉肽(心鈉)抗體IgG