操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
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產品名稱 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X96742 |
商品屬性：
名稱 RK1 (大鼠腎細胞) 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 背景描述RK1細胞系來源于一大鼠的腎組織，2007年由中國科學院昆明細胞庫建立。 生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋15% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:3 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
大鼠 Cadherin-8 / CDH8 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 BAFFR / TNFRSF13C 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
狗 Ephrin-A5 / EFNA5 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
狗 ALK1 / ACVRL1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 TIM3 / HAVCR2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 Contactin 1 / CNTN1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 TSPAN8 / Tetraspanin
RK1 (大鼠腎細胞)四硫磺酸鹽煌綠增菌液（TTB肉湯） TTB Broth 10ml*20支/包 0.312-20 ng/mL 鯉春病毒(SVCV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
2 ug pPRIME-TREX-GFP-FF3 pPRIME-TREX-GFP-FF3 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人膽汁酸受體(Bile acid receptor)ELISA試劑盒
50T 流行性出血熱漢坦病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Potassium voltage-gated channel subfamily B member 2
10g L- 苯 L-Phenylalanine 室溫干燥避光保存
C.L.E.D培養(yǎng)基添加劑 C.L.E.D Medium Supplement 1ml*5支 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Synaptosomal-associated protein 25
緩沖動力-硝酸鹽培養(yǎng)基 Buffered Power - nitrate medium 250g 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Decorin
普通瓊脂 Nutrient Agar 250g 0.156-10 ng/mL 人線粒體肌脫氫(SarDH)ELISA試劑盒
10mL 亞氨二乙酸介質 IDA（Iminodiacetic Acid）Resin 常溫保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Transmembrane 4 L6 family member 20
100mL MOPS Buffer,0.5M,pH5.5 MOPS Buffer,0.5M,pH5.5 常溫保存
變形桿菌成套生化鑒定管（BXWS） BXWS 13種*1套/盒*10盒T1N3肉湯進口、國產T1N3 Broth250克霍亂弧菌的生長試驗
50次 植物葉綠體蛋白提取試劑盒 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Heterogeneous nuclear ribonucleoproteins A2/B1
