細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
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產品名稱 | 大鼠心肌細胞 |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 |
分類 | 原代細胞 |
貨號 | GOY-01X0948 |
商品介紹:
名稱 大鼠心肌細胞 2.組織來源:心臟組織 3.產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介: 大鼠心肌細胞分離自心臟組織;心臟是脊椎動物身體中最重要的一個器官,主要功能是為血液流動提供壓力,把血液運行至身體各個部分。心臟由心肌構成,左心房、左心室、右心房、右心室四個腔組成。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開,故互不相通,心房與心室之間有瓣膜(房室瓣),這些瓣膜使血液只能由心房流入心室,而不能倒流。心臟的作用是推動血液流動,向器官、組織提供充足的血流量,以供應氧和各種營養物質,并帶走代謝的終產物(如二氧化碳、無機鹽、尿素和尿酸等),使細胞維持正常的代謝和功能。心肌細胞呈菱形、多邊形等不規則形狀;細胞培養2h后開始貼壁,呈梭形;到12h左右,細胞開始伸出偽足,呈菱形、多角形;細胞分離培養48h以后,大部分伸出偽足、呈巴掌狀,部分心肌細胞會出現搏動;心肌細胞為終末分化細胞,在體外不增殖。體外培養的心肌細胞可保持結構及功能上的某些特點,并具有自發性節律搏動,且心肌細胞的培養具有簡便、定量、重復性好以及不受神經體液因素的影響等特點。利用培養的心肌細胞在探索非血液動力學因素所致的心肌肥厚的調節,研究心肌細胞的生物力學、凋亡、受體下調、缺血預處理、信號通路、對作用于心臟的新藥進行篩選并對其安全性進行評價以及從培養的心肌細胞中提取有價值的生物因子等方面具有廣闊的應用前景,對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。 5.方法簡介: ()實驗室分離的大鼠心肌細胞采用膠原酶-聯合消化法結合差速貼壁法,并用化學試劑抑制法篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測: ()實驗室分離的大鼠心肌細胞經α-Sarcometric actin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息: 包被條件PLL(0.1mg/ml) 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-R073 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態梭形、多角形 傳代特性屬于終末分化細胞;屬于不增殖細胞群 消化液0.25% 培養條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
使用方法:
收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細胞培養箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩定細胞狀態。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養瓶中的培養基,用PBS清洗細胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代,然后補充新鮮的*培養基至5mL,放入37℃,5% CO2細胞培養箱中培養;
4) 待細胞*貼壁后,培養觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養基。
培養操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
250μg 淀粉樣 β- 蛋白片段 25-35 Amyloid β-Protein Fragment 25-35 -20℃保存 15.6-1000 pg/mL 人含P8和FADD樣凋亡調節因子(CFLAR)ELISA試劑盒
抗生素檢定培養基7號 Antibiotic Agar NO.7 250g 0.78-50 ng/mL 人細胞結合蛋白2(CRABP2)ELISA試劑盒
1mL Protein A磁珠 0.312-20 ng/ml 人層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒
2 ug pTK-
大鼠心肌細胞10000mU 三腺苷雙 Apyrase -20℃保存
Rabbit Anti-mouse IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的兔抗小鼠IgM 規格: 0.1ml
phgophs-ATG4C(Ser398) 磷酸化自噬相關蛋白4C抗體 規格: 0.1mlDRIP1/C14orf28 多巴胺受體相互作用蛋白1抗體 規格: 0.2ml
Goat Anti-Chicken IgG/AP 堿性磷酸(AP)標記的羊抗雞IgG 規格: 0.1ml
CHRNA3/AChRα3 堿型乙酰受體α3抗體 規格: 0.2ml
CDK2 周期素依賴性激2抗體 規格: 0.1ml
Donkey Anti-Goat IgG 驢抗羊IgG 規格: 1mg
Phospho-MKK3(Ser189)/MKK6(Ser207) 磷酸化絲裂原活化蛋白激MKK3/6抗體 規格: 0.1mlMARCH11 膜相關環指蛋白11抗體 規格: 0.2ml
LACE1 泌升高蛋白1抗體 規格: 0.2mlBAI2/Brain Specific Angiogenesis Inhibitor 2 腦特異性管生成抑制蛋白2抗體 規格: 0.2ml
Annexin A9 膜粘連蛋白9抗體 規格: 0.2ml
SASS6 紡錘體組裝異常蛋白6抗體 規格: 0.2ml
1瓶 LL/2(LLC1)細胞株 LL/2(LLC1) 低溫運輸和保存