使用方法:
收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細胞培養箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩定細胞狀態。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養瓶中的培養基,用PBS清洗細胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代,然后補充新鮮的*培養基至5mL,放入37℃,5% CO2細胞培養箱中培養;
4) 待細胞*貼壁后,培養觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養基。
公司細胞現貨供應,質量有保證、*、實驗效果好,我司為您提供免費代測服務,同時提供最新價格、說明書、規格、用途、實驗原理等相關操作說明。
產品名稱 | 小梁網細胞 |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 |
分類 | 原代細胞 |
貨號 | GOY-01X1098 |
商品介紹:
名稱 小梁網細胞 2.組織來源:眼球 3.產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介: 人小梁網細胞分離自眼球組織;小梁網由角膜基質纖維、后界膜和角膜內皮向后擴展而成,覆蓋在鞏膜靜脈竇的內側。小梁網細胞在眼內壓調節中起著關鍵作用;小梁網細胞內有特定的神經遞質和神經肽受體,其中包括腎上腺素、乙酰和神經肽Y。青光眼是由于眼內壓力升高而造成的一種不可逆致盲眼病,小梁網細胞的體外培養是青光眼病因學研究的重要手段之一。在小梁網細胞中,一長串的血管活性多肽和生長因子能夠觸發細胞內信號傳導機制,小梁網細胞可合成不同類型的細胞外基質蛋白以及金屬。形態學觀察可見,剛從組織塊長出的原代細胞,形態各異,多數呈星狀或不規則形。細胞有胞突,核橢圓形,胞體肥大,胞漿豐富,且可見吞噬顆粒。隨著細胞的增生及相互融合為單層,細胞的形態趨于一致。胞漿的色素顆粒及胞突消失,排列緊密呈類似上皮細胞的扁橢圓形或不規則形。胞體透亮,包膜清晰。 5.方法簡介: ()實驗室分離的人小梁網細胞采用組織貼塊法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測: ()實驗室分離的人小梁網細胞經NSE(神經元特異性烯醇化酶)免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息: 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-H132 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態梭形、多角形 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25% 培養條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
培養操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
1%NaCl甘露糖 20支 0.469-30 ng/mL ELISA Kit for Human Complement C1q subcomponent subunit C
2 ug pCDH-EF1-copGFP pCDH-EF1-copGFP 低溫運輸,-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Myeloblastin
HBI微生物生化鑒定條 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human C-C motif chemokine
小梁網細胞GRAMD3/NS3TP2 丙型毒-NS3反轉錄激活蛋白2抗體 規格: 0.2ml
10U 二酯Ⅱ Phosphodiesterase Ⅱ -20℃保存
phospho-CstF64(Ser83) 磷酸化細胞分裂相關蛋白CSTF64抗體 規格: 0.1ml
3%NaCl雙水解 20支
Rabbit anti-Dog IgG whole serum 兔抗狗IgG抗清 規格: 1mlGADD45 gamma 生抑制DNA損傷基因45γ抗體 GADD45γ 規格: 0.2ml
100mL Transformation Buffer-2 Transformation Buffer-2 常溫保存
Phospho-MARCKS (Ser152/156) 磷酸化蛋白激C底物Marcks抗體 規格: 0.1ml
2 ug pBudCE4.1-EGFP pBudCE4.1-EGFP 低溫運輸,-20℃保存
HBXIP 毒X蛋白相互作用蛋白 規格: 0.2ml
TP53TG5 p53靶蛋白5抗體 規格: 0.2ml
250mL Formalin-Zinc Acetate Solution Formalin-Zinc Acetate Solution 常溫保存
NK-2R 神經激肽A受體/K物質受體抗體 規格: 0.1ml