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貨號 | BJ-X97006 |
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操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
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產品名稱 | |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 |
貨號 | BJ-X97006 |
商品屬性:
名稱 小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞 2.組織來源:肺組織 3.產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介: 小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞分離自肺組織;肺泡由單層上皮細胞構成的半球狀囊泡。肺中的支氣管經多次反復分枝成無數細支氣管,它們的末端膨大成囊,囊的四周有很多突出的小囊泡,即為肺泡。小肺泡細胞,又稱I型肺泡細胞,厚約0.1微米,基底部是基底膜,無增殖能力。大肺泡細胞,又稱Ⅱ型肺泡細胞,分泌表面活性物質(二棕櫚酰),以降低肺泡表面張力。Ⅱ型肺泡細胞位于Ⅰ型肺泡細胞之間,數量較Ⅰ型肺泡細胞多,但覆蓋面積比Ⅰ型肺泡細胞小。細胞立方形或圓形,頂端突入肺泡腔。細胞核圓形,胞質著色淺、呈泡沫狀。電鏡下,細胞游離而有少量微絨毛,胞質內富含線粒體和溶酶體,有較發達的粗面內質網和高爾基復合體。核上方有較多的分泌顆粒,電子密度高、大小不等,直徑約0.1-1.0μm顆粒內含有平行排列的板層狀結構,稱為嗜餓性板層小體。小體內的主要成分為磷脂,以二棕櫚酰為主,此外還有糖胺多糖及蛋白質等。顆粒內物質釋放出來后,在肺泡表面形成一層粘液層,稱為表面活性物質(surfactant)。表面活性物質有降低肺泡表面張力、穩定肺泡大小的作用。呼氣時肺泡縮小,表面活性物質密度增加,表面張力降低,防止肺泡過度塌陷;吸氣時肺泡擴張,表面活性物質密度減小,肺泡回縮力加大,可防止肺泡過度膨脹。表面活性物質的缺乏或變性均可引起肺不張,過度通氣可造成表面活性物質缺乏;吸入毒氣可直接破壞表面活性物質。Ⅱ型肺泡細胞有分裂、增殖并分化為Ⅰ型肺泡細胞的潛能,故具有修復受損傷上皮的作用。 5.方法簡介: ()實驗室分離的小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞采用彈性蛋白酶灌注消化法結合差速貼壁法,并通過上皮細胞專用培養基培養篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測: ()實驗室分離的小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞經SP-C免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息: 包被條件鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-M003 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態上皮細胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25% 培養條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
重組斑馬魚 EFNB2A / Ephrin B2a 蛋白 (His 標簽)
重組斑馬魚 EFNB2A / Ephrin B2a 蛋白 (Fc 標簽)
重組大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 蛋白 (Fc 標簽)
重組大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 蛋白 (His 標簽)
重組食蟹猴 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (His 標簽)
重組大鼠 Ephrin-A1 / EFNA1 蛋白 (His 標簽)
重組大鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (Fc 標簽)
重組大鼠 E
小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞Torque Teno Sus Virus Type 1 (TTSuV-1)豬托克特諾病毒1型(豬細環病毒1型)熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用) 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Rabbit Anti-Biotin/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗抗體IgG 規格: 0.1mlPGGT1β 香葉烯基轉移1β抗體 規格: 0.2ml
Theileria buffeli水牛泰勒蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Aurora B/STK-1 有絲分裂激B抗體 規格: 0.1mlphospho-PPAR alpha(Ser12) 磷酸化α型-過氧化活化增生受體抗體 規格: 0.1ml
Porcine rotavirus group C豬輪狀病毒C群探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Mouse Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的小鼠抗兔IgG 規格: 0.1mlGlycogen synthase 1 葡萄糖合成1抗體 規格: 0.2ml
Herba cynomorii鎖陽探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周SHP-1 造細胞磷酸抗體 規格: 0.1mlMTUS1/Angiotensin II Type 2 Receptor 管緊張素Ⅱ2型受體相互作用蛋白抗體 規格: 0.1ml
Mycobacterium leprae麻風分枝桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-horse IgM/Cy5.5 Cy5.5標記的兔抗馬IgM 規格: 0.1mlIL-6 白介素6抗體 規格: 0.1ml
Wolbachia spp.沃爾巴克氏通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周NGFR/p75NTR 神經生因子受體抗體 規格: 0.1mlRabbit Anti-horse IgG/Cy7 Cy7標記的兔抗馬IgG 規格: 0.1ml
Carp Edema Virus,CEV 鯉浮腫病毒LAMP試劑盒 定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周LAP3 亮氨基肽3抗體 規格: 0.2mlNDUFA9 NDUFA9蛋白抗體 規格: 0.2ml
蝦源性成分LAMP試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Bone sialoprotein 骨涎蛋白抗體 規格: 0.1mlDGAT1/Diglyceride acyltransferase 二脂酰甘油酰基轉移抗體 規格: 0.2ml
Pseudorabies Virus(PrV)偽狂犬病病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Na+/K+-ATPase Alpha1 Na+/K+-ATPase α1 鈉鉀ATPα1多肽抗體 規格: 0.2mlFBXW12/FBXO35 FBXW12蛋白抗體 規格: 0.2ml
Pseudomonas syringae pv. tomato丁香假單胞桿番茄致病變種PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周SLY 2型豬鏈球菌溶素抗體 規格: 1mlC17orf78 17號染色體開放閱讀框78抗體 規格: 0.2ml
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