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商品屬性：

細胞培養步驟:

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

293T [HEK-293T](人胚腎細胞)     1×10?cells/T25培養瓶    細胞系    

3T3-L1 (小鼠胚胎成纖維細胞)    1×10?cells/T25培養瓶    細胞系    

4T1 (小鼠乳腺癌細胞)     1×10?cells/T25培養瓶    細胞系    

6T-CEM (人T細胞白血病細胞)     1×10?cells/T25培養瓶    細胞系    

769-P (人腎細胞腺癌細胞)     1×10?cells/T25培養瓶    細胞系    

786-O [786-0] (人腎透明細胞腺癌細胞)     1×10?cells/T25培養瓶    細胞系    

95-D [PLA-801D] (人高轉移肺癌細胞)     1×10?cells/T25培養瓶    細胞系    

A172 (人膠質母細胞瘤細胞)     1×10?cells/T25培養瓶    細胞系    

A2780 (人卵巢癌細胞)    1×10?cells/T25培養瓶    細胞系    

A-375 (人惡性黑色素瘤細胞)     1×10?cells/T25培養瓶    細胞系    

A-431 (人表皮癌細胞)     1×10?cells/T25培養瓶    細胞系    

A549 [A-549] (人非小細胞肺癌細胞)     1×10?cells/T25培養瓶    細胞系    

Mouse thyrotropin-releasing hormone ELISA KIT    96T/48T    小鼠促甲狀腺素釋放激素(TRH)    

Mouse CRH ELISA Kit    96T/48T    小鼠促腎上皮質激素釋放激素(CRH)     

Mouse Insulin Receptor β（ISR-β）ELISA KIT    96T/48T    小鼠胰島素受體β（ISR-β）    

Mouse HbA1c ELISA Kit    96T/48T    小鼠糖化血紅蛋白（HbA1c）    

Mouse lymphocyte function associated antigen-3 ELISA Kit    96T/48T    小鼠LFA-3(CD58)    

Mouse HLA-2 ELISA Kit    96T/48T    小鼠組織相容性抗原（HLA-2）    

Mouse HLA-1 ELISA Kit    96T/48T    小鼠組織相容性抗原（HLA-1）    

Mouse Bone morphogenetic protein 7 ELISA Kit    96T/48T    小鼠骨成型蛋白質7（BMP-7）    

Mouse HA ELISA Kit    96T/48T    小鼠透明質酸(HA)    

Mouse 25(OH)D3 ELISA Kit    96T/48T    小鼠25羥基（25(OH)D3）    

Mouse Myoglobin ELISA Kit    96T/48T    小鼠肌紅蛋白(MYO)    

Mouse Thromboxane B2 ELISA Kit    96T/48T    小鼠血栓素（TXB2）    

Mouse acetylcholine ELISA Kit    96T/48T    小鼠乙酰(ACh)    

Mouse Tissue Polypeptide Antigen ELISA Kit    96T/48T    小鼠組織多肽抗原（TPA）    

Mouse t-PA ELISA Kit    96T/48T    小鼠組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)     

5637 (人膀胱癌細胞)Mouse β-Thromboglobulin ELISA Kit    96T/48T    小鼠β血小板球蛋白(β-TG)    

Mouse dihy－drotestosterone ELISA Kit    96T/48T    小鼠雙氫睪酮(DHT)ELISA試劑盒    

Mouse SPE(IgG,M) ELISA Kit    96T/48T    小鼠抗體(SPE)    

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。