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商品屬性：

細胞培養步驟:

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

食蟹猴 EphB1 / EPHT2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

大鼠 PDGFRa / CD140a 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

大鼠 SPN / CD43 / Sialophorin 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

大鼠 CDH13 / Cadherin-13 / H Cadherin 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

大鼠 HER4 / ErbB4 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

狗 IL13RA2 / IL13R 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

狗 CCN3

PC-3M IE8 (前列腺癌高轉移細胞株)250mL HEPES Buffer,1M,pH7.5  HEPES Buffer,1M,pH7.5  常溫保存 0.156-10 ng/mL 人基質金屬蛋白7(MMP-7/MAT)ELISA試劑盒

250mL Blocking Reagent with Triton X-100 & Sheep Serum Blocking Reagent with Triton X-100 & Sheep Serum 常溫保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Inhibin beta A chain

50T 日本血吸蟲PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存 0.78-50 ng/mL 人角化富含蛋白(KPRP)ELISA試劑盒

葡萄球菌選擇性瓊脂110 Staphylococcus Selective Agar 10 250g 312-20000 pg/mL 人基質金屬蛋白11(MMP11)ELISA試劑盒

綠膿菌素測定用假單胞菌瓊脂培養基（PAP）  250g 78-5000 pg/mL 人β淀粉樣蛋白42(Beta-amyloid protein 42)ELISA試劑盒

25g DEAE葡聚糖凝膠 A-50 DEAE-Sephadex A-50 室溫保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Arachidonate 12-lipoxygenase, 12S-type

1g 3,3’- 二氨基聯苯胺四鹽酸 DAB HCl -20℃保存 7.8-500 ng/mL ELISA Kit for Human Pulmonary surfactant-associated protein B

5g 2,4- 二氯苯氧乙酸 2,4-D(2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid) 室溫保存B12測定用培養基進口、國產Vitamin B12 Assay Broth250克嬰兒食品和乳粉中B12測定

2 ug pBMN pBMN 低溫運輸，-20℃保存

0.1mL×10 BL21(DE3)pLysS化學感受態 BL21 (DE3) pLysS Competent Cell -80℃保存 0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Rat rMCP-2

500mL HEPES Buffered Saline,5X,pH7.4 HEPES Buffered Saline,5X,pH7.4 常溫保存 0.312-20 ng/mL 溶藻弧菌(VA)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。