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貨號	BJ-X96464

細胞培養步驟:

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

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產品名稱	LS 174T (LS174T) (結腸腺癌細胞)
規格	1×10?cells/T25培養瓶
貨號	BJ-X96464

商品屬性：

名稱 LS 174T (LS174T) (結腸腺癌細胞)

別稱Ls174T; LS174t; Ls-174-T; LS-174-T; LS 174 T; LS-174T; Ls-174T; LS 174T; LS-174; LS174

種屬人類

年齡（性別）女性，58歲

組織來源直腸；結直腸腺癌

生長特性貼壁細胞

細胞形態上皮細胞樣

背景描述LS 174T細胞是LS 180細胞的化變種。LS 174T細胞比親本更易傳代，像LS 180細胞一樣生成大量的癌胚抗原(CEA)。電鏡研究表明，LS 174T細胞有豐富的微絲和細胞質粘液素液泡。LS 174T細胞直腸抗原3陽性；p53抗原表達陰性，但mRNA表達陽性。LS 174T細胞角蛋白染色陽性；LS 174T細胞癌基因c-myc、N-myc、H-ras、N-ras、Myb和fos的表達呈陽性；癌基因k-ras和sis的表達未做檢測。

生物安全等級1

生長培養基MEM（ATCC改良)＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例1:2-1:4

推薦換液頻率2~3次/周

倍增時間~30-40小時

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

致瘤性Yes, in nude mice (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells).

抗原表達情況serologically defined colon cancer antigen 3; Homo sapiens, expressed HLA A2, B13, B50; Blood Type O

基因表達情況carcinoembryonic antigen (CEA), interleukin 10 (IL-10), interleukin 6 (IL-6), mucin The production of CEA in the ATCC seed stock was 1944 ng per 10^6 cells in 10 days.

圖片13.jpg

細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

大鼠 IL8RA 基因全長ORF克隆

大鼠 IL27 基因全長ORF克隆

大鼠 IL21 基因全長ORF克隆

大鼠 IL8RB 基因全長ORF克隆

大鼠 IL4R 基因全長ORF克隆

大鼠 IL2RG 基因全長ORF克隆

大鼠 IL1R2 基因全長ORF克隆

大鼠 IL25 基因全長ORF克隆

大鼠 IL19 基因全長ORF克隆

大鼠 TNFRSF18 基因全長ORF克隆

LS 174T (LS174T) (結腸腺癌細胞) 25U 脫羧 Tyrosine Decarboxylase -20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Ferritin light chain

雙料乳糖膽鹽發酵培養基 Double Lactose Bile Medium 250gYGC瓊脂進口、國產YGC Agar用于奶和奶制品中霉菌及酵母菌分離培養(ISO方法)250

2 ug T-Rex system T-Rex system 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人BRCA1基因1相鄰蛋白(NBR1)ELISA試劑盒

500mL Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH4.0 Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH4.0 常溫保存 15.6-1000 pg/mL 人γ干擾素誘導單核因子(MIG/CXCL9)ELISA試劑盒

25mg 熒光胺 Fluorescamine 室溫保存 0.312-20 ng/mL 豬戊型肝炎病毒(HEV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)

2 ug pCMV-hyPBase pCMV-hyPBase 低溫運輸，-20℃保存 31.2-2000 pg/mL 人骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA試劑盒

1mL Real-Time PCR稀釋液 Diluent for Real-Time PCR -20℃保存 31.2-2000 pg/mL 人糖皮質激素受體（GR）ELISA試劑盒

25mL Bovine Gamma Globulin Solution，1mg/mL Bovine Gamma Globulin Solution，1mg/mL 常溫保存

芽孢桿菌培養基 Bacillus Megatherium Medium 250g 12.5-800 pg/mL 人牙本質唾液蛋白(DSPP)ELISA試劑盒

10g 麗春紅 S Ponceau S 室溫干燥保存 15.6-1000 pg/mL 人中性粒防御素1(Neutrophil defensin 1)ELISA試劑盒

2 ug pLLP-STII pLLP-STII 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Metaxin-2