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貨號	BJ-X96718

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

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產品名稱	NCI-H358 (非小細胞肺癌細胞)
規格	1×10?cells/T25培養瓶
貨號	BJ-X96718

商品屬性：

名稱 NCI-H358 (非小細胞肺癌細胞)

別稱H358; H-358; NCIH358

種屬人類

年齡（性別）男性

組織來源細支氣管及肺泡癌；非小細胞肺癌；肺；細支氣管；肺泡

生長特性貼壁細胞

細胞形態上皮細胞樣

背景描述NCI-H358細胞是于1981年從一位開始化療之前的患者的腫瘤組織中分離得到的。超微結構研究表明，NCI-H358細胞的細胞質中有Clara細胞的特征結構，NCI-H358細胞表達主要的肺表面結合蛋白SP-A和RNA，不表達SP-B和SP-C；NCI-H358細胞在軟瓊脂中的克隆形成效率為0.83%。

生物安全等級1

生長培養基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例1:3-1:4

推薦換液頻率2~3次/周

倍增時間~38-60小時

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

致瘤性Yes, the cells produce tumors in athymic nude mice.

基因表達情況lung surfactant associated protein A (SP-A), The cells expressed protein and RNA of SP-A, the major lung surfactant associated protein.

細胞培養步驟:

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

圖片13.jpg

細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

人 STX7 / Syntaxin 7 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 NPDC-1 / NPDC1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 FAIM3 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 BTN3A3 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 LRG1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 Hexosaminidase B / HEXB 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 PLA2G2D / Phospholipase A2 IID 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人

NCI-H358 (非小細胞肺癌細胞) 2000U T4 RNA 連接 2（截短型） T4 RNA Ligase 2(truncated) -20℃保存

固體培養基 Solid medium 250g 0.78-50 ng/mL 人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA試劑盒

100mL Transformation Buffer-2 Transformation Buffer-2 常溫保存 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 8

1mL Protein A瓊脂糖 Protein A Agarose 4℃保存 0.312-20 ng/mL 人NADH 脫氫(輔Q)Fe-S 蛋白8(NDUFS8)ELISA試劑盒

250mL BSA Blocking Buffer in PBS with azide BSA Blocking Buffer in PBS with azide 常溫保存 0.312-20 ng/mL 人Nesfatin1蛋白(Nesfatin-1)ELISA試劑盒

棉子糖發酵管-O157菌生化鑒定 20支假單胞分離瓊脂進口、國產Pseudomonas Isolation Agar用于假單胞菌群的測定250

500mL Wash Buffer,pH8.0 Wash Buffer,pH8.0 常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human TGF-beta-activated kinase 1 and MAP3K7-binding protein 1

2 ug pGL4.29[Luc2P/CRE/Hygro] pGL4.29[Luc2P/CRE/Hygro] 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人五聚素3(PTX3)ELISA試劑盒

50T 豬流行性腹瀉病毒定量RT-PCR檢測試劑盒低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人的肽S轉移ω1(GSTO1)ELISA試劑盒

50T 腦膜炎奈瑟菌CCR檢測試劑盒低溫運輸，-20℃保存 0.625-40 ng/mL 人多藥耐藥蛋白1(MDR1)ELISA試劑盒

5次大提柱式真菌RNAout Maxi Column Fungal RNAOUT 4℃保存SC增菌液進口、國產Selenite Cystine Broth250克沙門氏菌選擇性增菌培養