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實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃制造，并經過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細胞培養的優點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應用的學科領域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經濟

可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。

狗 IL5 基因全長ORF克隆

狗 IL1B 基因全長ORF克隆

狗 IL1A 基因全長ORF克隆

狗 IL21 基因全長ORF克隆

狗 IL6 基因全長ORF克隆

狗 IL2 基因全長ORF克隆

大鼠 IL20Ra 基因全長ORF克隆

食蟹猴 CD3E 基因全長ORF克隆

大鼠 LAMP1 基因全長ORF克隆

大鼠 KIRREL3 基因全長ORF克隆

LM/TK (LMTK-) (小鼠胸腺激酶缺陷細胞)BCYE瓊脂平板 BCYE Agar Base 10個/包 6.25-400 ng/mL ELISA Kit for Hyaluronic acid

1mL 溶液,100mg/mL Actidione Solution -20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human CD276 antigen

現隱肉湯 Presence Absence Broth 250g 0.156-10 ng/mL 人基質金屬蛋白12(MMP-12)ELISA試劑盒

2500U 末端脫氧核苷轉移  乙酰胺瓊脂進口、國產Acetamide Agar250克綠膿桿菌的選擇性分離培養

500mL PBS-Tween-20 Solution,10X  PBS-Tween-20 Solution,10X  常溫保存 15.6-1000 pg/mL 人二價金屬轉運蛋白1(DMT1)ELISA試劑盒

2 ug pcDNA3 mRFP pcDNA3 mRFP 低溫運輸，-20℃保存M-腸球菌瓊脂進口、國產M-Enerococcus Agar250克用于濾膜法或直接平板法，從自來水、食品或其他標本中分離腸球菌

酸性L-G培養基基礎 Acid L-G Medium Base 250g 31.2-2000 pg/mL 人鈉依賴5-羥色胺轉運體(SERT)ELISA試劑盒

2 ug pADH2 pADH2 低溫運輸，-20℃保存

10mL His標簽蛋白專用蛋白抑制劑 Protease Inhibitor for His-tagged Protein -20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Mitogen-activated protein kinase 8

雙水解（綠膿桿菌）  20支酵母氮源-無氨基酸進口、國產YNB100gBR

5g 膽酸 Cholic Acid 室溫保存

培養操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃制造，并經過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。