操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

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商品屬性：

細胞培養步驟:

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

大鼠 CD68 基因全長ORF克隆

大鼠 EPCAM 基因全長ORF克隆

大鼠 CD47 基因全長ORF克隆

大鼠 CD63 基因全長ORF克隆

大鼠 CD53 基因全長ORF克隆

大鼠 CD28 基因全長ORF克隆

大鼠 KLRD1 基因全長ORF克隆

大鼠 REG1A 基因全長ORF克隆

大鼠 CD59 基因全長ORF克隆

大鼠 CD52 基因全長ORF克隆

L1210 (小鼠白血病細胞)10mg 5′ - 三鳥苷三鈉 Guanosine 5′-Triphosphate (GTP),Trisodium -20℃保存

1瓶 NCI-H157株 NCI-H157 低溫運輸和保存 0.156-10 ng/mL 人C型凝集素結構域家族4成員E(CLEC4E)ELISA試劑盒

50T 單增李斯特菌prfA基因(274bp)常規PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

2 ug pG5-Luc pG5-Luc 低溫運輸，-20℃保存 1.56-100 U/mL ELISA Kit for Human Docking protein 6

10 mg Hydroxystilbamidine  Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Interferon-induced protein 44

肉浸液肉湯培養基 Meat Infusion Broth 250g 1.56-100 nmol/mL ELISA Kit for Valine

2 ug pCAMBIA1305 pCAMBIA1305 低溫運輸，-20℃保存

5次 中提柱式BAC DNAout Midi Column BAC  DNAOUT 常溫保存(RNase A溶液4℃保存) 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human C-X-C motif chemokine 6

2 ug pcDNA4/TO/Myc-His C pcDNA4/TO/Myc-His C 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Major vault protein

2 ug pAAV-LacZ pAAV-LacZ 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 nmol/mL 雌二醇(E2)ELISA試劑盒

0.1%溶液  1ml*5 78-5000 pg/mL 人S100鈣結合蛋白A9/鈣粒蛋白B(S100A9)ELISA試劑盒