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商品屬性：

細胞培養步驟:

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

大鼠 IL15 基因全長ORF克隆

大鼠 IL12B 基因全長ORF克隆

大鼠 BST1 基因全長ORF克隆

大鼠 ADAM17 基因全長ORF克隆

大鼠 SLAMF1 基因全長ORF克隆

大鼠 THBD 基因全長ORF克隆

大鼠 PDGFRB 基因全長ORF克隆

大鼠 MPL 基因全長ORF克隆

大鼠 SEMA7A 基因全長ORF克隆

大鼠 SDC1 基因全長ORF克隆

KB (口腔表皮樣癌細胞)2 ug pDsRed-C1 pDsRed-C1 低溫運輸，-20℃保存

250mL NP40 Lysis Buffer，High Salt（高鹽型NP40裂解液） NP40 Lysis Buffer，High Salt 常溫保存 0.312-20 nmol/mL ELISA Kit for Triglyceride

250mL Nitrocellulose Stripping Buffer,10X（硝酸纖維素膜剝離緩沖液，10X） Nitrocellulose Stripping Buffer,10X 常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Keratin, type II cytoskeletal 2 epidermal

即用型無菌瓶裝液體培養基   0.312-20 ng/mL 人神經源性位點缺口同系物蛋白4(NOTCH4)ELISA試劑盒

100mL RNA電泳液,10× RNARUN Buffer, 10× 常溫 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human PHD finger protein 1

5ug ROX參考染料II ROX Reference Dye II  4℃或-20℃避光保存 31.2-2000 pg/mL 人催乳素誘導蛋白(PIP)ELISA試劑盒

10mL DNA上樣液 (紅色),6× DNAON  4℃保存 0.312-20 ng/mL. ELISA Kit for Human Retrotransposon-derived protein PEG10

100mg 3- 異丁基 -1- 甲基 IBMX -20℃保存

2 ug pOTB7 FKBP4 pOTB7 FKBP4 低溫運輸，-20℃保存

1瓶 Jurkat,Clone E6-1 [Jurkat E6-1]株 Jurkat,Clone E6-1 [Jurkat E6-1] 低溫運輸和保存 15.6-1000 pg/mL 人白介素17B(IL-17B)ELISA試劑盒

25µg Xa因子蛋白 Factor Xa Protease -20℃保存

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。