細胞培養步驟:

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

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商品屬性：

細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

人 HNF4A 轉錄變體3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 SLC2A1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 SLC2A1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽

人 RORA 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 MMP13 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽

人 PPARA 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 PPARA 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽

人 PGC 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標

RBE (肝膽管癌細胞) 2 ug pET-9d pET-9d 低溫運輸，-20℃保存 3.12-200 ng/mL ELISA Kit for Human Cartilage oligomeric matrix protein

50mL EGTA Solution（EGTA溶液）,0.5M,pH7.4  EGTA Solution,0.5M,pH7.4  常溫保存 0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human Corticotropin-releasing factor-binding protein

1袋 定影粉 Fixing Solution,Powder 室溫避光保存 31.2-2000 pg/mL 豬流感病毒通用型(SIV-U) 核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

2 ug pPICZ A pPICZ A 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Acetyl-CoA acetyltransferase, mitochondrial

1g 魯米諾 Luminol  4℃保存 0.156-10 ng/mL 人熱休克蛋白40(HSP40)ELISA試劑盒

緩沖蛋白胨水（BPW） Buffer peptone water（BPW） 9ml*20支/包 1.56-100 ng/ml 人巨噬來源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒

液體雙抗增菌液 Liquid Double Anti Bacteria 250g蛋白胨進口、國產Peptone250克BR

2000 U 限制性內切EcoRI Restriction Endonuclease -20℃保存 0.312-20 ng/ml 人層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒

5u 氧化 Xanthine Oxidase 4℃保存 0.156-10 ng/mL 人骨骼肌特異性受體激(MUSK)ELISA試劑盒

30次 細菌總蛋白質微量提取試劑盒 Bacterial Total Protein Miniprep Kit 4℃保存 0.625-40 ng/mL 人G蛋白偶聯受體48ELISA試劑盒

含225ml志賀氏菌増菌肉湯均質袋 Shigella Enrichment Broth 10個/包