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貨號 | BJ-X96404 |
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細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
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產品名稱 | |
規格 | 1×10?cells/T25培養瓶 |
貨號 | BJ-X96404 |
商品屬性:
名稱 FRhK-4 (恒河猴胚腎細胞) 別稱FRHK-4; Frhk-4; FRhK4; Fetal Rhesus Kidney-4 種屬獼猴,恒河猴 年齡(性別)雌性,胎兒 組織來源正常腎 生長特性貼壁細胞 細胞形態上皮細胞樣 背景描述FRhK-4細胞來自300克重恒河猴正常雌性胚胎的腎組織;FRhK-4細胞是上皮細胞樣的連續細胞株,且已被數家實驗室用作甲型肝炎研究。 生物安全等級1 生長培養基DMEM+10% FBS+1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液:55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ |
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
大鼠 NIT1 基因全長ORF克隆
大鼠 CLCA1 基因全長ORF克隆
大鼠 SEPT2 基因全長ORF克隆
大鼠 KDELR3 基因全長ORF克隆
大鼠 SGK196 基因全長ORF克隆
大鼠 TMED10 基因全長ORF克隆
大鼠 RHD 基因全長ORF克隆
大鼠 HSD17B11 基因全長ORF克隆
大鼠 CYP2C23 基因全長ORF克隆
大鼠 ERP44 基因全長ORF克隆
FRhK-4 (恒河猴胚腎細胞)含225ml FB1增菌液均質袋 FB1 Broth 10個/包 0.156-10 ng/mL 人DNA(胞5)甲基轉移1( Dnmt1)ELISA試劑盒
100g 鹽酸胍 Guanidine Hydrochloride 4℃密封干燥保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Lactoperoxidase
牛津瓊脂(OXA)基礎 Oxford Agar Base 250g
50T 小腸結腸耶爾森菌PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存CCDA添加劑進口、國產CCDA Supplement每支添加于200mlCCDA基礎中2ml*10支
100次 柱式質粒 DNAout Column Plasmid DNAOUT 常溫保存(RNase A溶液4℃保存) 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Fatty acid-binding protein, liver
50T 禽腦脊髓炎病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人的神經纖維網蛋白1(NRP1)ELISA試劑盒
100次 古細菌種屬鑒定 PCR Mix 1(rDNA) Bacterial DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存
250mL Dextrose Gelatin Veronal DGV Dextrose Gelatin Veronal DGV 常溫保存牛肉浸粉 進口、國產Beef Extract Powder培養基原材料,提供細菌生長所需的生長因子250
500 U 限制性內切SacI Restriction Endonuclease -20℃保存 0.78-50 ng/ml 人L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒
50T 蟹特定基因序列PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人肌原纖蛋白1(FBN1)ELISA試劑盒
250mL PIPES Buffer,1.0M, pH7.5 PIPES Buffer,1.0M, pH7.5 常溫保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Integrin alpha-V
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