操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

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商品屬性：

細胞培養步驟:

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

大鼠 PRNP 基因全長ORF克隆

大鼠 NCR1 基因全長ORF克隆

大鼠 FZD4 基因全長ORF克隆

大鼠 JAM2 基因全長ORF克隆

大鼠 CD320 基因全長ORF克隆

大鼠 CD5 基因全長ORF克隆

大鼠 GYPC 基因全長ORF克隆

大鼠 MRC1 基因全長ORF克隆

大鼠 KLRC1 基因全長ORF克隆

大鼠 LAG3 基因全長ORF克隆

Jurkat, Clone E6-1 (T淋巴細胞白血病細胞) 1g  Bacitracin 室溫避光保存 0.47-30 ng/mL 人DnaJ同系物亞科B成員3(DNAJB3)ELISA試劑盒

動力-硝酸鹽培養基（A法） Power - nitrate medium 250g

500g 酵母浸膏 Yeast Extract   室溫避光干燥保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Cytochrome c oxidase subunit 1

1瓶 DCS（實體瘤）株 DCS（實體瘤） 低溫運輸和保存 0.156-10 ng/mL 人Rho-GTP激活蛋白21(ARHGAP21)ELISA試劑盒

M1培養基 M1 Medium 250g 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Dickkopf-related protein 2

1000U 耐熱型MMLV逆轉錄(H-) Thermal Stable MMLV Reverse Transcriptase (H-) -20℃保存

麥康凱瓊脂平板（9cm） MacConkey Agar 10個/包 0.312-20 ng/mL 人胃泌酸調節素（OXM）ELISA試劑盒

2 ug pLenti4/TO/V5-DEST pLenti4/TO/V5-DEST 低溫運輸，-20℃保存

抗生素檢定培養基 32 號  250g 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Versican core protein

氯、碘中和劑管（帶棉簽）  10ml*20

2 ug TK Renilla TK Renilla 低溫運輸，-20℃保存