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貨號	BJ-X96394

細胞培養步驟:

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

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產品名稱	DLD-1 (結直腸腺癌上皮細胞)
規格	1×10?cells/T25培養瓶
貨號	BJ-X96394

商品屬性：

名稱 DLD-1 (結直腸腺癌上皮細胞)

別稱DLD 1; DLD1; CoCL3

種屬人類

年齡（性別）成人

組織來源結直腸腺癌上皮細胞

生長特性貼壁細胞

細胞形態上皮細胞樣

背景描述DLD-1細胞是由D·L·Dexter和其同事于1977-1979年分離的兩株結直腸腺癌細胞株中的一株。在ATCC和其它地方進行的DNA指紋鑒定和染色體組型分析表明DLD-1細胞與HCT-15細胞相似，說明這兩者是來自同一個人的不同克隆。DLD-1細胞和HCT-15細胞的遺傳起源可通過DNA指紋鑒定證實，但染色體組型分析顯示它們缺乏染色體標記一致改變或數目上一致改變。DLD-1細胞的CSAp陰性(CSAp-)，p53抗原表達呈陽性(p53抗原產生了一個C→T點突變導致241位的Ser→Phe)。DLD-1細胞角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性，癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表達呈陽性，癌基因N-myc的表達未做檢測。DLD-1細胞表達腫瘤特異性核基質蛋白CC-2、CC-3、CC-4、CC-5和CC-6。1979年提交到ATCC的DLD-1細胞代數不明且污染了支原體，其后經過12周多種抗生素聯合培養處理，處理之后每周用Hoechst染色和標準培養法檢測。其后連續11個月不加抗生素培養，DLD-1細胞所有的檢測呈陰性。

生物安全等級1

生長培養基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例1:3-1:4

推薦換液頻率2~3次/周

倍增時間~24-48小時

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

致瘤性Yes, in nude mice (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells).

抗原表達情況Blood Type O. The cells are weakly positive for keratins and vimentin. The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining. DLD-1 cells are positive for p53 antigen expression (the p53 antigen produced has a C -> T mutation re

基因表達情況carcinoembryonic antigen (CEA) 0.5 ng/10^6 cells/10 days; colon antigen 3.

圖片13.jpg

細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

大鼠 ATPAF2 基因全長ORF克隆

大鼠 HSD3B1 基因全長ORF克隆

大鼠 THEM4 基因全長ORF克隆

大鼠 ACTC1 基因全長ORF克隆

大鼠 HMG1L1 基因全長ORF克隆

大鼠 CAR2 基因全長ORF克隆

大鼠 ANXA5 基因全長ORF克隆

大鼠 VTN 基因全長ORF克隆

大鼠 ANXA1 基因全長ORF克隆

大鼠 SELM 基因全長ORF克隆

DLD-1 (結直腸腺癌上皮細胞) 100mL TABS Buffer,0.2M,pH9.0 TABS Buffer,0.2M,pH9.0 常溫保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Calcium-binding mitochondrial carrier protein Aralar1

2 ug pLKO-Tet-On pLKO-Tet-On 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 對蝦黃頭病病毒(YHE)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)

200 mL 人血液和骨髓造血干分離液 1.068-1 Cell Separation Solution -20℃保存BGS瓊脂進口、國產BGS Agar250克沙門氏菌分離培養

2 ug pGAG424 pGAG424 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人核心蛋白聚糖(Decorin)ELISA試劑盒

乳糖蛋白胨培養液顆粒 Lactose Peptone Broth 300ml/袋*10 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Peroxisome proliferator-activated receptor gamma

MUG快速鑒定大腸試劑 5ml*10支/盒 78-5000 pg/mL 人骨涎蛋白(BSP)ELISA試劑盒

1瓶 HuT 78株 HuT 78 低溫運輸和保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Transmembrane protein 126A

MiddleBrook7H10瓊脂 MiddleBrook7H10 Agar 250g 0.156-10 ng/mL 三碘甲狀腺原(T3)ELISA試劑盒

1mL 哺乳動物蛋白抑制劑 Protease Inhibitor for Mammal -20℃保存 0.312-20 ng/mL 禽傳染性支氣管炎病毒(AIBV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)

2 ug pDG1663 pDG1663 低溫運輸，-20℃保存快速硫化氫(H2S)試驗瓊脂進口、國產用于彎曲桿菌的硫化氫試驗（GB標準）250

硫酸錳營養瓊脂培養基 Manganese Sulfate Nutrient Agar 250g