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商品屬性：

細胞培養步驟:

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

小鼠 NT5E / CD73 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 DR6 / TNFRSF21 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 CD8A / MAL 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 CD4 / LEU3 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 DLL4 / Delta4 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 REG3A / HIP 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 REG1A / PSPS 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 CD5 / LEU1 人細胞裂

CCD-18Co (結腸組織細胞)50次 DNA電泳分子量標準(φX174 DNA/HaeⅢ) DNAMETER（3） 4℃保存 78-5000 pg/mL 人腫瘤壞死因子配體超家族成員14(TNFSF14)ELISA試劑盒

10mL 戊二醛，25% 水溶液 Glutaraldehyde Solution    室溫保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human L-dopachrome tautomerase

脫纖維羊血 Off fiber sheep blood 50ml

2 ug pCMV-Tet 3G pCMV-Tet 3G 低溫運輸，-20℃保存MCP瓊脂進口、國產MCP Agar用于產氣莢膜梭菌的計數和培養(Acumedia 方法)250

50T 漢坦病毒Ⅱ型PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 豬內源性逆轉錄病毒(PERV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

平板計數瓊脂（含麥芽提取物） Plate Count Agar 250g 15.6-1000 pg/mL 人Myc原癌基因蛋白(MYC)ELISA試劑盒

50套 微型離心管專用研磨杵 (有離心管)  Microtube Pestle 常溫 0.156-10 ng/mL 人基質金屬蛋白16（MMP-16）ELISA試劑盒

2 ug pLVPTH2-tTR-KRAB-Cerulean-scrambled_shRNA_2 (1837 ng) pLVPTH2-tTR-KRAB-Cerulean-scrambled_shRNA_2 (1837 ng) 低溫運輸，-20℃保存YPD肉湯進口、國產Yeast Extract Peptone Dextrose Broth250克BR

菌種和底層瓊脂培養基 Medium I(foe Seed and Basal Layer) 250g

10mg 植物血球凝集素 M PHA-M(Phytohemagglutinin M) 4℃保存

100mg  Dexamethasone 4℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Neurturin

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。