細胞培養步驟:

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

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商品屬性：

細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

小鼠 IL2RB / CD122 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽

小鼠 FOLR1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

小鼠 P53 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽

小鼠 VEGF-C 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

小鼠 CXCL5 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽

人 HNRNPK 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽

人 IDO2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽

人 SIRT4 基因全長ORF克隆

CRT (神經膠質瘤細胞)2 ug pMMB66EH pMMB66EH 低溫運輸，-20℃保存

沙氏葡萄糖瓊脂培養基 Sabouraud’s Glucose Agar Medium 250g 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Meteorin-like protein

沙門、志賀菌屬瓊脂培養基(SS)  250g 1.56-100 ng/mL 脂氧素B4(Lipoxin B4)ELISA試劑盒

50uL 電泳級耐熱型SYBR染料 SuperSYBR，EG 常溫閉光 0.156-10 ng/mL 人跨膜蛋白126A(Transmembrane protein 126A)ELISA試劑盒

2 ug pcDNA3.1（-）/Myc-His B pcDNA3.1（-）/Myc-His B 低溫運輸，-20℃保存

10mL 弗氏不*佐劑 Freund’s Adjuvant, Incomplete liquid 4℃保存4-甲基傘形酮-D-葡萄糖醛酸苷進口、國產（MUG）0.01g添加于100ml LST-MUG中用于0157鑒定0.1

2mL dITP溶液，2.5mM dITP Solution，100mM -20℃保存

2 ug pEGFP- N2 pEGFP- N2 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Serpin A12

LB肉湯顆粒 LB Broth 300ml/袋*10亞碲酸鹽卵黃增菌液進口、國產Egg-Yolk Tellurite Emulsion50毫升貝爾德-帕克基礎配套試劑

250mL Human RBC Lysis Buffer（人紅裂解液）  Human RBC Lysis Buffer 常溫保存 0.156-10 ng/mL 人無翅型MMTV整合位點家族成員5A(WNT5A)ELISA試劑盒

50T 麻疹病毒PCR檢測試劑盒   低溫運輸，-20℃保存 3.12-200 U/L 人線粒體氨甲?；D移(OTCase)ELISA試劑盒