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上海莼試生物技術(shù)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第9年

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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2人肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞操作

人肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞操作

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產(chǎn)品型號(hào)T25m2

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2021-06-19 19:03:46瀏覽次數(shù):127次

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人肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞操作收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,375%CO2培養(yǎng)。

產(chǎn)品名稱

人肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞操作

規(guī)格

T25m2

貨號(hào)

CS-963712

人肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞【Human Lung: Pulmonary Vein Endothelial Cells產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1 HBVHCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊)
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法; 
2
.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 
3
.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕; 
4
.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率; 
5
.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4放置;
3、剩下的組織再加入34mL酶消化液,混懸10s,置37消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10 FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37 5CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min
2PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4條件下,用0.1Triton X-100透膜15min
3PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37條件下放置1h
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
雞可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA檢測(cè)試劑盒ChickenSolubleIercellularAdhesionMolecule-1,sICAM-1 96T/48T 氯化金  Gold (III) chloride tetrahydrate  質(zhì)量規(guī)格:BC

雞可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA檢測(cè)試劑盒ChickensolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCR 96T/48T 石墨粉(>99%,BR)  Graphite powder  質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR

雞流行性乙型腦炎抗體IgG(JEIgG)ELISA檢測(cè)試劑盒ChickenJapaneseEncephalitisIgG,JEIgG 96T/48T 己二醇(>98%BR)  Hexylene glycol  質(zhì)量規(guī)格:>98%BR

雞硫酸類肝素(HS)ELISA檢測(cè)試劑盒Chickenheparansulfate,HS 96T/48T 六甲基磷酰三胺(>98%,BR)  HMPA, hexamethylphosphoramide  質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR

雞酶(CA)ELISA檢測(cè)試劑盒Chickencarbonicanhydrase,CA 96T/48T 還原茚三酮二水合物(>98%,BR)  Hydrindantin hydrate  質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR

雞核糖核酸(Irna)ELISA檢測(cè)試劑盒ChickenImmuneRNA,Irna 96T/48T 中粘度羥丙基纖維素  Hydroxypropyl cellulose  質(zhì)量規(guī)格:4000~6500 mpa.s,BR

雞球蛋白G(IgG)ELISA檢測(cè)試劑盒ChickenImmunoglobulinG,IgG 96T/48T 3-吲哚基-beta-D-吡喃半乳糖苷(>98%(TLC),BR)  Indoxyl-Gal  質(zhì)量規(guī)格:>98%(TLC),BR

雞熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA檢測(cè)試劑盒ChickenHeatShockProtein20,HSP-20 96T/48T 3-吲哚基-beta-D-葡糖苷酸環(huán)已胺鹽(>98%(HPLC),BR)  Indoxyl-Glucuronide  質(zhì)量規(guī)格:>98%(HPLC),BR

雞熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA檢測(cè)試劑盒ChickenHeatShockProtein40,HSP-40 96T/48T 代苯(>98%,醫(yī)藥級(jí))  Iodobenzene  質(zhì)量規(guī)格:>98%,醫(yī)藥級(jí)

雞熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA檢測(cè)試劑盒ChickenHeatShockProtein60,HSP-60 96T/48T 硫化鐵 (II)(>70%,BR)  Iron (II) sulfide  質(zhì)量規(guī)格:>70%,BR
小鼠活化素A(Activin-A)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseActivinAELISAKit 96T/48T 苦瓜皂苷 C HPLC95% 20mg

人核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)試劑盒 Human ai-fibrillarin aibody,AFA/snoRNP/U3RNP ELISA Kit (E)阿魏酸乙酯 HPLC98% 20mg

Ratdipeptidylpeptldase,DPPELISAKit大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 香葉基,,','四羥基黃酮 HPLC95% 20mg

4%多聚甲固著液50毫升 香葉基,,','四羥基黃酮 HPLC95% 20mg

Mouseeosinophilcationicprotein,ECPELISA試劑盒小鼠嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白(ECP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 高黃綠酸 HPLC95% 20mg

小鼠無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員5A(W5A)ELISA試劑盒 ,英文名: W5A ELISA Kit 桑辛素 T HPLC95% 20mg

兔抗糖蛋白抗體(GP)ELISA檢測(cè)試劑盒Rabbitai-glycoproteinaibody,GPELISAKit 96T/48T 桑辛素 M HPLC95% 20mg

牛心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-)試劑盒 Bovine cardiac oponin I,cTn-I ELISA kit beta鼠李素 HPLC95% 20mg

英文名稱HumanainuclearaibodyELISAKIT人抗核抗體(ANA)規(guī)格:96T/48T 羥基彌羅松酚 HPLC95% 20mg

地生蘭(terresial)移植維護(hù)培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑 荷包牡丹堿 HPLC95% 20mg
人肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞操作RatFactor-relatedApoptosisligand,FASLELISAKit大鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石蕊  Litmus  質(zhì)量規(guī)格:AR

RatFactor-relatedApoptosisligand,FASLELISA試劑盒大鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石蕊  Litmus  質(zhì)量規(guī)格:AR

RatFattyacyl-CoAsyhetase,ACSELISAKit大鼠脂酰輔酶A合成酶(ACS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石墨粉(>99%,BR)  Graphite powder  質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR

RatFattyacyl-CoAsyhetase,ACSELISA試劑盒大鼠脂酰輔酶A合成酶(ACS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石榴皮鞣素(標(biāo)準(zhǔn)品)  Punicalin  質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品

RatFcoagulationfactor,FELISAKiatFcoagulationfactor,FELISAKit大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石榴皮鞣素 HPLC98% 10mg

RatFcoagulationfactor,FELISA試劑盒RatFcoagulationfactor,FELISA試劑盒大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石蠟油  Paraffin oil, light fraction  質(zhì)量規(guī)格:分子生物學(xué)級(jí),PCR Grade

Ratferritin,FEELISAKit大鼠鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石斛堿(標(biāo)準(zhǔn)品)  Dendrobine  質(zhì)量規(guī)格:HPLC97%,標(biāo)準(zhǔn)品

Ratferritin,FEELISA試劑盒大鼠鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石斛堿 HPLC98% 20mg

RatFibrinogen,FbgELISAKit大鼠血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石斛酚(標(biāo)準(zhǔn)品)  dendrophenol  質(zhì)量規(guī)格:鑒別

RatFibrinogen,FbgELISA試劑盒大鼠血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 石斛酚 HPLC95% 20mg

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