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細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
小鼠血管內皮細胞操作 | T25m2 | CS-963804 |
小鼠血管內皮細胞【Mouse Vascular: Normal Vascular Endothelial Cells】產品描述:提供的原代細胞均來自新鮮組織,用于培養該細胞的組織采集是根據國際標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質量的穩定。在生物技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態,進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。
發貨:客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養瓶和相應的細胞密度。提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發貨的新鮮細胞還包含:1、發貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養基;2、說明書及注意事項;3、售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養箱內靜置后2-3h,再進行后續的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞處理方法:
以下細胞處理方法及細胞說明書僅供參考,具體操作還需要根據到貨時細胞密度,細胞生長狀態等具體情況,酌情處理,如需要更詳細技術指導,請及時電話或郵件聯系。
一.貼壁細胞
客戶接收到細胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養瓶外部。
肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
顯微鏡觀察細胞,當細胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細胞應該在37度培養箱預溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度,培養瓶應預留一部分培養基繼續培養。
嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
1000rpm,5min離心,重懸細胞。換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2 培養。
二.懸浮細胞
1. 接收到細胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養瓶外部。
2. 肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4. 將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,重懸細胞。 換新的細胞培養瓶和新鮮培養基,37℃,5%CO2 培養細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養基,吹打均勻后,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進行凍存。
FLAG(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微升 前杯莧甾酮 HPLC≥96% 5mg
FLUORIDE血液抗凝液100毫升 茜素 HPLC≥98% 20mg
Formolsublimate固著液50毫升 羌活醇 HPLC≥98% 20mg
FRUORESCAMINE蛋白質濃度熒光定量試劑盒100 強力霉素 HPLC≥98% 20mg
FRUORESCAMINE蛋白質濃度熒光定量試劑盒100 羥基紅花黃色素A HPLC≥98% 20mg
FSH-BETA蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25 羥基積雪草苷 HPLC≥98% 20mg
FSH-BETA蛋白共沉淀分析試劑盒5 羥基積雪草酸 HPLC≥98% 20mg
G418溶液10毫克/毫升 羥基酪醇 HPLC≥98% 20mg
Gamborg’sB5基礎培養基500毫升溶液/片劑 羥基酪醇醋酸酯 HPLC≥98% 20mg
Gamborg’sB5*培養基500毫升溶液/片劑 羥基檸檬酸 HPLC≥98% 20mg
英文名稱HumanBonemorphogeneticproteieceptor1AELISAKit人骨成型蛋白質受體1A(BMPR1A)規格:96T/48T 胸腺肽alpha 1 Thymosin alpha 1 Acetate 質量規格:BR,進分
動物細胞/組織活性線粒體分離試劑盒10/50 替加氟 Tegafur 質量規格:>98%
RatsolubleClusterofdiffereiation86,sCD86ELISA試劑盒大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒規格:96T/48T 替加氟(標準品) Tegafur 質量規格:HPLC法含量測定
小鼠髓鞘堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒 ,英文名: MBP ELISA Kit 阿昔莫司,阿西莫司 Acipimox 質量規格:>98.5%,BR
小鼠神經營養因子3(-3)ELISA檢測試劑盒MouseNeuroophin3,-3ELISAkit 96T/48T 阿昔莫司,阿西莫司(標準品) Acipimox 質量規格:HPLC>98%,標準品
人谷氨酸脫羧酶自身抗體IgM(GAD-Ab-IgM)試劑盒 human GAD-Ab-IgM ELISA Kit 阿達帕林 Adapalene 質量規格:>98.5%
Ratglialcellline-derivedneuroophicfactor,GDNFELISAKit大鼠膠質細胞系來源的神經營養因子(GDNF)ELISA試劑盒規格:96T/48T 阿達帕林(標準品) Adapalene 質量規格:HPLC>99%,標準品
AP標記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微升 阿德福韋 Adefovir 質量規格:>98%
MousehepatitisBviruscoreaibody,HBcAbELISA試劑盒小鼠乙型肝炎核心抗體(HBcAb)ELISA試劑盒規格:96T/48T 阿德福韋(標準品) Adefovir 質量規格:>98%,標準品
小鼠髓0脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒 ,英文名: MBP ELISA Kit 阿爾法骨化醇 alfacalcidol 質量規格:>99%
小鼠血管內皮細胞操作冰凍切片組織INSULIN蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 齊墩果酸(高98%) Oleanolic acid 質量規格:HPLC≥98%,BR
冰凍切片組織IP3R受體蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 齊墩果酸(標準品) Oleanolic acid 質量規格:HPLC≥98%,標準品
冰凍切片組織JNK/SAPK蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 齊墩果酸 HPLC≥98% 20mg
冰凍切片組織MAPK蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 齊墩果酸 Oleanolic acid 質量規格:HPLC≥95%,BR
冰凍切片組織MYC蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 漆黃素; 紫鉚素 HPLC≥98% 20mg
冰凍切片組織NFKAPPABP50蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 漆黃素(標準品) Fisetin 質量規格:HPLC≥98%,標準品
冰凍切片組織NFKAPPABP65蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 漆黃素 HPLC≥98% 20mg
冰凍切片組織P16蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 漆黃素 Fisetin 質量規格:HPLC≥95%,BR
冰凍切片組織P21蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 榿木酮 HPLC≥98% 20mg
冰凍切片組織P27蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 七葉皂苷鈉(標準品) Aescinate 質量規格:HPLC≥98%,標準品
我公司提供原代細胞、細胞系、細胞株和菌種,細胞庫管理規范,提供的細胞株背景清楚,提供參考文獻和*培養條件。純度可達 90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、 HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
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